Applications of CRISPR/Cas technology and nanovehicles in the edition and detection ofpathogenic mutations
La tecnología CRISPR/Cas ha revolucionado el campo de la edición génica. Las nucleasas CRISPR componen un conjunto de herramientas versátiles que ya han sido empleadas para generación de knock-in y knockout, edición de bases y modulación transcripcional. Además, algunas proteínas Cas, como Cas12a o...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2024 |
| País: | España |
| Institución: | Universidad Complutense de Madrid (UCM) |
| Repositorio: | Docta Complutense |
| Idioma: | inglés |
| OAI Identifier: | oai:docta.ucm.es:20.500.14352/102037 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.14352/102037 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | 620.22(043.2) Nanoquímica Nanochemistry Química 23 Química |
| Sumario: | La tecnología CRISPR/Cas ha revolucionado el campo de la edición génica. Las nucleasas CRISPR componen un conjunto de herramientas versátiles que ya han sido empleadas para generación de knock-in y knockout, edición de bases y modulación transcripcional. Además, algunas proteínas Cas, como Cas12a o Cas13, poseen una actividad trans adicional que puede utilizarse para detectar ácidos nucleicos. El sistema CRISPR/Cas resulta, por tanto, muy prometedor tanto para el tratamiento como para el diagnóstico de numerosas enfermedades. Este proyecto, centrado en las nucleasasCas12a y Cas9, pretende explorar ambos aspectos. Los trastornos genéticos son las principales dianas de las terapias basadas en CRISPR. Se trata de un grupo muy heterogéneo de enfermedades que provocan una elevada mortalidad y morbilidad a nivel mundial. La capacidad de las nucleasas Cas para cortar el ADN de manera específica allana el camino para la modificación selectiva de los cambios genéticos causantes de dichos trastornos. Esta modificación puede producirse a través de dos vías diferentes de reparación del ADN que se activan tras el corte: la unión de extremos no homólogos y la reparación dirigida por homología. La unión de extremos no homólogos es un mecanismo de reparación propenso a errores que puede aprovecharse para interrumpir la expresión de genes patógenos. La reparación dirigida por homología, por su parte, permite editar genes de manera precisa, lo que puede emplearse, por ejemplo, para corregir mutaciones patógenas. Sin embargo, se ve seriamente limitada por su baja eficiencia. En esta tesis, hemos explorado el potencial terapéutico de ambas vías de reparación, centrándonos especialmente en la entrega de ribonucleoproteínas CRISPR. Para ello, el primer paso ha sido implementar un protocolopara la expresión heteróloga y purificación de las proteínas Cas12a y Cas9, así como una serie de ensayos para validar su actividad nucleasa tanto ex cellullo como in cellullo... |
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