Péptidos sintéticos del GB virus C. Aplicación en el diagnóstico de infección y en el diseño de potenciales agentes terapéuticos contra el VIH-1

[spa] El GB virus C (GBV-C), también conocido como virus de la hepatitis G, es un virus humano no patogénico. Su infección es bastante frecuente, encontrándose incluso en personas sanas. Su prevalencia es mucho mayor en individuos considerados de riesgo, ya que comparte las vías de transmisión con o...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Fernández Arauzo, Leticia
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2012
País:España
Institución:Universidad de Barcelona
Repositorio:Dipòsit Digital de la UB
OAI Identifier:oai:diposit.ub.edu:2445/121666
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/2445/121666
http://hdl.handle.net/10803/482076
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Química farmacèutica
Pèptids
VIH (Virus)
Immunoassaig
Microarrays
Pharmaceutical chemistry
Peptides
Hepatitis G
HIV (Viruses)
Immunoassay
Protein microarrays
Descripción
Sumario:[spa] El GB virus C (GBV-C), también conocido como virus de la hepatitis G, es un virus humano no patogénico. Su infección es bastante frecuente, encontrándose incluso en personas sanas. Su prevalencia es mucho mayor en individuos considerados de riesgo, ya que comparte las vías de transmisión con otros virus, como por ejemplo con el virus de la hepatitis B, el virus de la hepatitis C o el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Numerosos estudios asocian la coinfección del GBV-C y el VIH con una menor progresión de la enfermedad y con una mayor supervivencia de los pacientes una vez que el SIDA se ha desarrollado. Sin embargo, el mecanismo de acción aún no se ha determinado. De este modo, el estudio de la interacción entre ambos virus podría dar lugar a nuevos agentes terapéuticos para el tratamiento del SIDA. Por otro lado, en cuanto al diagnóstico, actualmente no existe ningún sistema comercial para detectar marcadores específicos de la infección causada por el GBV-C. De esta manera, en esta tesis se ha estudiado la capacidad de diversas moléculas peptídicas de regiones de la proteína de envoltura E2 y de la proteína no estructural NS4a del GBV-C para inhibir la entrada del VIH-1 a la célula, con el fin de conocer su potencial aplicación como agentes terapéuticos contra dicho virus. Asimismo, se ha estudiado la utilidad de dichas construcciones para desarrollar nuevos sistemas de diagnóstico de la infección causada por el GBV-C, empleando el ensayo inmunoenzimático de ELISA y la técnica de microarrays. En primer lugar, se ha realizado un estudio detallado de la proteína E2 del GVB-C mediante la preparación de microarrays peptídicos con 124 secuencias lineales de dicha proteína. Para ello, se han empleado sueros procedentes de pacientes infectados por el VIH-1, de los cuales se conocía la presencia o ausencia de anticuerpos anti-E2 del GBV-C, y sueros de personas voluntarias sanas. Este ensayo ha permitido identificar dominios potencialmente antigénicos de la proteína E2 del GBV-C. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos y estudios previos realizados en el grupo de investigación, se ha llevado a cabo la síntesis de moléculas peptídicas derivadas del dominio N-terminal de la proteína E2 del GBV-C. Por un lado, se ha realizado la síntesis en fase sólida siguiendo una estrategia Fmoc/tBu, de péptidos lineales y de MAPs tetraméricos de tipo lineal homogéneo (con cuatro secuencias peptídicas iguales) y de tipo lineal heterogéneo (con secuencias peptídicas iguales dos a dos). También se han sintetizado péptidos cíclicos en solución mediante la reacción de transtioesterificación intramolecular conocida como Ligación Química Nativa. Por último, se ha llevado a cabo la formación de MAPs tetraméricos de tipo cíclico mediante ligación quimioselectiva en solución. Todas las moléculas sintetizadas se han caracterizado por HPLC, UPLC y espectrometría de masas (ESI y MALDI-TOF) y se han purificado por HPLC semipreparativo. Posteriormente, se han realizado ensayos de fusión celular con el fin de evaluar la actividad anti-VIH-1 de las moléculas peptídicas que derivan del dominio N-terminal de la proteína E2 del GBV-C. Las líneas celulares empleadas fueron la Hela-env y la TZM-bl. De este estudio pudo concluirse que las construcciones de tipo cíclico tienen mayor tendencia hacia una mayor inhibición de la entrada del VIH-1 en la célula. Se ha estudiado la capacidad para detectar anticuerpos anti-GBV-C de todas las secuencias y construcciones sintéticas mediante el ensayo inmunoenzimático de ELISA con sueros procedentes de pacientes con hepatitis C crónica, de pacientes sometidos a hemodiálisis, infectados con VIH-1 y sueros de donantes voluntarios sanos. Los resultados obtenidos demostraron la potencial utilidad diagnóstica de la región E2(7-26) del GBV-C. Por último, con un panel de sueros de pacientes infectados por el VIH-1, del que no se tenía información sobre la presencia o ausencia de anticuerpos anti-E2 del GBV-C, se ha evaluado el valor diagnóstico de los dominios peptídicos identificados mediante microarrays. La combinación de las secuencias peptídicas ensayadas ha permitido establecer una reactividad del 47% en cuanto a la detección de anticuerpos anti-E2 del GBV-C en personas infectadas por el VIH-1. Además, esta tecnología ha miniaturizado el ensayo inmunoenzimático de ELISA y ha demostrado la utilidad de los péptidos sintéticos como potenciales antígenos para el desarrollo de un sistema de diagnóstico de la infección del GBV-C.

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