Caracterización molecular de especies ocratoxígenas del género Aspergillus sección Nigri

En la presente Memoria de Tesis Doctoral se ha estudiado la micobiota de la uva en diferentes períodos de maduración, con el objetivo de identificar las especies ocratoxígenas presentes. Para ello se han muestreado 7 viñedos distintos, situados principalmente en la costa Mediterránea española, duran...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Bau Puig, Marta
Tipo de recurso: tesis doctoral
Fecha de publicación:2006
País:España
Institución:Universitat Autònoma de Barcelona
Repositorio:Dipòsit Digital de Documents de la UAB
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ddd.uab.cat:38319
Acceso en línea:https://ddd.uab.cat/record/38319
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Aspergil·lus
Fongs en l'agricultura
Raïms
Descripción
Sumario:En la presente Memoria de Tesis Doctoral se ha estudiado la micobiota de la uva en diferentes períodos de maduración, con el objetivo de identificar las especies ocratoxígenas presentes. Para ello se han muestreado 7 viñedos distintos, situados principalmente en la costa Mediterránea española, durante los años 2001, 2002 y 2003. Asimismo, se ha analizado la capacidad de producir ocratoxina A de las cepas potencialmente productoras aisladas en este muestreo. Por otro lado, se han caracterizado a nivel molecular 226 cepas del género Aspergillus sección Nigri potencialmente ocratoxígenas. Todas las cepas del estudio molecular son aislamientos de uva de distintos orígenes geográficos: España, Francia, Grecia, Israel, Italia y Portugal. La micobiota predominante de la uva de los viñedos españoles muestreados perteneció a los géneros Alternaria, Cladosporium y Aspergillus, mientras que el género Penicillium representó menos del 3% de los aislamientos. La elevada incidencia de Alternaria spp. y Cladosporium spp. en los primeros períodos de muestreo decreció con la maduración de la uva, mientras la presencia de Aspergillus spp. incrementó significativamente. En todos los casos, se encontraron diferencias significativas en la incidencia de estos géneros en cada período de muestreo. Durante los tres años de muestreo, se aislaron de las uvas un total de 1812 cepas de Aspergillus spp., de entre las cuáles solamente 13 fueron identificadas como A. ochraceus, mientras que 1423 se identificaron como pertenecientes al agregado A. niger, y 226 como A. carbonarius. El único aislamiento identificado como P. verrucosum entre las 214 cepas de Penicillium spp. aisladas mostró la capacidad de producir citrinina, pero no OA. Los aislamientos pertenecientes a Aspergillus sección Nigri representaron alrededor del 90% del total de cepas del género aisladas. Aunque se presentaron en todas los períodos de muestreo, la presencia de las especies del agregado A. niger y de A. carbonarius fue significativamente superior en la vendimia. Por otra parte, el número de aislamientos en el medio DRBC fue superior que en MEA, si bien estas diferencias no resultaron significativas. Las pepitas de uva analizadas no presentaron contaminación fúngica, por lo tanto se asume que la contaminación con hongos productores de OA en la uva proviene de la superficie del fruto. En cuanto a los resultados obtenidos en el estudio de producción de OA de las cepas aisladas de viñedos españoles, se ha evidenciado la importante contribución de A. carbonarius en la contaminación por OA en uva, y por tanto, en el vino. Esta afirmación se deriva no sólo de la elevada incidencia que presenta esta especie en las uvas, especialmente en la vendimia, sino también del porcentaje de cepas productoras, un 100% en este estudio. En cuánto a las otras especies de Aspergillus sección Nigri aisladas, solamente el 0,7% de los aislamientos del agregado A. niger resultaron ser ocratoxígenos, mientras que ninguno de los aislamientos uniseriados produjeron OA. También se detectó la producción de OA por otras especies de Aspergillus no pertenecientes a la sección Nigri. Algunas de estas especies producen OA en grandes cantidades, pero su baja incidencia en la uva hace que su importancia como fuentes de contaminación sea escasa. En relación al estudio molecular de A. carbonarius, se han caracterizado mediante RAPD y secuenciación de la región ITS-5.8S del rDNA 53 cepas aisladas de uva de diferentes países europeos. Cuarenta y nueve de las cepas presentaron un patrón de RAPD muy similar y la secuencia de la región ITS-5.8S prácticamente idéntica. Todas estas cepas produjeron OA en distintas cantidades. Las 4 cepas restantes mostraron un patrón de RAPD diferente y la secuencia de la región ITS-5.8S distinta a las demás, además de ser las únicas cepas no productoras de OA. Estos aislamientos podrían representar una nueva especie dentro de la sección Nigri. Por otra parte, en el estudio molecular del agregado A. niger se han caracterizado 173 cepas procedentes de distintos orígenes geográficos, mediante una técnica de RFLP de la región ITS-5.8S del rDNA. Todas las cepas se agruparon en los 2 patrones de RFLP descritos previamente: tipo N (43% de las cepas) y tipo T (57% de las cepas). Se detectó la producción de OA en 20 de las 173 cepas (11,6%). Todas las cepas ocratoxígenas mostraron el patrón tipo N.

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