Development of FiCAT gene writing tool for ex vivo engineering of Hematopoietic Stem & Progenitor Cells (HSPCs). Safe implementation and detailed molecular characterization for pre-clinical therapeutic applications
A Integra Therapeutics, hem desenvolupat FiCAT (Find and Cut-and-Transfer), una innovadora tecnologia d’edició genòmica que combina la precisió de CRISPR/Cas amb una transposasa piggyBac modificada per a la inserció eficient i específica de fragments d’ADN grans i menuts. Aquesta tesi es centra en l...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2025 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/695621 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/695621 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Teràpia cel·lular Cell therapy Terapia celular HSPCs Edició genètica Gene editing Edición genética Edició genòmica Genome engineering Edición genómica FiCAT Caracterització molecular Molecular characterization Caracterización molecular 575 |
| Sumario: | A Integra Therapeutics, hem desenvolupat FiCAT (Find and Cut-and-Transfer), una innovadora tecnologia d’edició genòmica que combina la precisió de CRISPR/Cas amb una transposasa piggyBac modificada per a la inserció eficient i específica de fragments d’ADN grans i menuts. Aquesta tesi es centra en l’aplicació ex vivo de FiCAT en cèl·lules primàries, especialment en Cèl·lules Mare i Progenitores Hematopoètiques (HSPCs), mitjançant els formats basats en ribonucleoproteïna (RNP) i ARNm. L’eina ha sigut optimitzada amb el desenvolupament de FiCAT split, separant els mòduls de la transposasa i Cas per a millorar el lliurament i l’eficiència. La validació funcional es va dur a terme mitjançant expressió del transgen (citometria de flux), PCRs de la unió per a confirmar la integració dirigida, i tècniques NGS (INSERT-seq i anàlisi d’indels). La caracterització molecular es va realitzar en línia cel·lular C2C12 abans de l’aplicació en HSPCs, on s’avaluaren eficiència i toxicitat. També es validaren càrregues terapèutiques mitjançant estratègies de gene trap. Aquest treball demostra el potencial de FiCAT per a una edició genòmica segura i precisa per a aplicacions terapèutiques. |
|---|