Desarrollo y aplicación de la tecnología CRISPR para el estudio de procesos reproductivos en mamíferos
Las aplicaciones de la mutagénesis dirigida se han visto obstaculizadas por dificultades técnicas. La baja eficiencia de la recombinación homóloga (HR), el único método disponible para llevar a cabo esta tarea antes del descubrimiento de las endonucleasas específicas de sitio, hace necesario el uso...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2021 |
| País: | España |
| Institución: | Universidad Complutense de Madrid (UCM) |
| Repositorio: | Docta Complutense |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:docta.ucm.es:20.500.14352/11385 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.14352/11385 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | 612.019(043.2) Fisiología comparada Physiology Comparative Fisiología veterinaria |
| Sumario: | Las aplicaciones de la mutagénesis dirigida se han visto obstaculizadas por dificultades técnicas. La baja eficiencia de la recombinación homóloga (HR), el único método disponible para llevar a cabo esta tarea antes del descubrimiento de las endonucleasas específicas de sitio, hace necesario el uso de células intermedias. Este requisito ha restringido en gran medida la mutagénesis dirigida al modelo del ratón de laboratorio, la única especie en la que se disponía de células madre pluripotentes como células intermediarias. El desarrollo de endonucleasas específicas sitios en los últimos años ha facilitado en gran medida la tarea de lograr una mutación en un lugar específico del genoma. Estas tecnologías incluyen la incorporación más notoria y reciente: CRISPR-Cas9. Mediante esta tecnología, pueden lograrse directamente modificaciones en un lugar específico del genoma mediante la transmisión de los componentes de CRISPR a un cigoto, evitando así la necesidad de células intermedias. Este avance facilita enormemente el proceso en ratones y, especialmente, en otras especies en las que, en ausencia de células madre, se requería la transferencia nuclear de células somáticas [en inglés “somatic cell nuclear transfer” (SCNT)], para generar mutagénesis dirigida. Además, la generación de mutantes en un solo paso permite el estudio de la función génica durante el desarrollo embrionario sin necesidad de mantener colonias de animales mutantes... |
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