Organización génica y regulación del sistema "hpx" implicado en la utilización de hipoxantina como fuente de nitrógeno en "Klebsiella pneumoniae"

La estructura molecular de diversos componentes celulares contiene, entre otros elementos, nitrógeno. La fuente de nitrógeno preferida por las bacterias y la mayoría de microorganismos es el amonio, el cual no siempre se encuentra disponible en el medio. Por ello, las bacterias han desarrollado meca...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Riva Pérez, Lucía de la
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2008
País:España
Institución:CBUC, CESCA
Repositorio:TDR. Tesis Doctorales en Red
OAI Identifier:oai:www.tdx.cat:10803/1058
Acceso en línea:http://www.tdx.cat/TDX-0619108-103232
http://hdl.handle.net/10803/1058
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Purines
Nitrògen
Amoni
Genòmica
Biotecnologia
Enterobacteris
Ciències de la Salut
577
Descripción
Sumario:La estructura molecular de diversos componentes celulares contiene, entre otros elementos, nitrógeno. La fuente de nitrógeno preferida por las bacterias y la mayoría de microorganismos es el amonio, el cual no siempre se encuentra disponible en el medio. Por ello, las bacterias han desarrollado mecanismos moleculares que les permiten obtener nitrógeno de fuentes alternativas como pueden ser las purinas. Este trabajo se centra en el metabolismo de las purinas como fuentes de nitrógeno en la enterobacteria <i>Klebsiella pneumoniae</i>. <br/><br/>En este trabajo hemos identificado y caracterizado el sistema génico de <i>K. Pneumoniae</i> implicado en la asimilación de hipoxantina como fuente de nitrógeno, al cual hemos denominado <i>hpx</i>. El sistema hpx está formado por cuatro unidades transcripcionales. Las unidades <i>hpxDE</i>, <i>hpxR</i> y <i>hpxO</i> se transcriben a partir de promotores dependientes de la subunidad (sigma-70) 70 de la RNA polimerasa, mientras que 9<i>hpxPQT</i> presenta un promotor dependiente de (sigma-54) 54. <br/><br/>El operón <i>hpxDE</i> está implicado en la oxidación de hipoxantina a ácido úrico. Sin embargo, los productos de los genes <i>hpxD</i> y <i>hpxE</i> no se asemejan a las xantina deshidrogenasas descritas hasta el presente. En base a la similitud de HpxD y HpxE con distintos componentes de la familia de las dioxigenasas, proponemos que el operón <i>hpxDE</i>codifica una dioxigenasa formada por una oxidorreductasa (HpxE) y una oxigenasa (HpxD). El producto génico del gen <i>hpxO</i> está implicado en la oxidación de ácido úrico a alantoína. Sin embargo, dicha proteína no presenta similitud a uricasas sino a monooxigenasas de compuestos aromáticos dependientes de FAD. Proponemos que HpxO es una FAD-monooxigenasa que catalizaría la oxidación de ácido úrico al intermediario 5-hidroxiisourato, el cual sería transformado a alantoína por la acción secuencial de las proteínas HpxT y HpxQ. El gen <i>hpxP</i> codifica un transportador de purinas cuyo sustrato muy probablemente es ácido úrico. El gen <i>hpxR</i> codifica una proteína de la familia de reguladores LysR que actúa como represor de su propia transcripción y como activador del operón <i>hpxDE</i> <br/><br/>El sistema <i>hpx</i> está sometido a una doble regulación, la llevada a cabo por el sistema global del nitrógeno y la llevada a cabo por la regulación específica de la vía. Mientras que el gen <i>hpxR</i> se expresa de manera constitutiva y el gen <i>hpxO</i> no está fuertemente regulado, los operones <i>hpxDE</i> y <i>hpxPQT</i> son inducidos tanto por limitación de nitrógeno como por la presencia de los inductores hipoxantina (<i>hpxDE</i>) o ácido úrico (<i>hpxPQT</i>). La regulación por nitrógeno del operón <i>hpxPQT</i> tiene lugar a través del sistema NTR de <i>K. Pneumoniae</i>, el cual se activa en condiciones de nitrógeno limitantes. El promotor PhpxP depende de la subunidad (sigma-54) 54 de la RNA polimerasa y es reconocido por el activador NtrC (<i>NiTrogen Regulatory protein C</i>). El regulador que reconoce el ácido úrico como molécula inductora todavía no ha sido identificado. Es de destacar que la regulación por nitrógeno del operón <i>hpxDE</i> no tiene lugar a través del sistema NTR. Resultados preliminares sugieren la existencia de un regulador no caracterizado hasta el presente al que proponemos denominar NR (<i>Nitrogen Repressor</i>). Este regulador reprimiría la expresión del operón <i>hpxDE</i> en condiciones de exceso de nitrógeno. Esta es la primera vez que se describe en <i>K. Pneumoniae</i> un sistema de regulación por nitrógeno distinto de NTR, hecho que evidencia la importancia del estudio del sistema génico hpx en esta enterobacteria. La regulación específica está llevada a cabo por el regulador HpxR, el cual reconoce a la hipoxantina como molécula inductora del operón <i>hpxDE</i>.

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