Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)

Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenòmica (CRAG)

Detalles Bibliográficos
Autor: Campos Gorgona, Nefertiti
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2013
País:España
Institución:CBUC, CESCA
Repositorio:TDR. Tesis Doctorales en Red
OAI Identifier:oai:www.tdx.cat:10803/124484
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/10803/124484
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Biologia molecular
Biología molecular
Molecular biology
Genètica vegetal
Genética vegetal
Plant genetics
Fotosíntesi
Fotosíntesis
Photosynthesis
Proteïnes
Proteínas
Proteins
Ciències de la Salut
577
id ES_b30feefafdbe4b8a01e25adf11bd3718
oai_identifier_str oai:www.tdx.cat:10803/124484
network_acronym_str ES
network_name_str España
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
title Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
spellingShingle Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
Campos Gorgona, Nefertiti
Biologia molecular
Biología molecular
Molecular biology
Genètica vegetal
Genética vegetal
Plant genetics
Fotosíntesi
Fotosíntesis
Photosynthesis
Proteïnes
Proteínas
Proteins
Ciències de la Salut
577
title_short Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
title_full Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
title_fullStr Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
title_full_unstemmed Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
title_sort Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)
dc.creator.none.fl_str_mv Campos Gorgona, Nefertiti
author Campos Gorgona, Nefertiti
author_facet Campos Gorgona, Nefertiti
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Santos Lozano, Mireia
Torne Cubiró, Josep M.
Universitat de Barcelona. Facultat de Farmàcia
dc.subject.none.fl_str_mv Biologia molecular
Biología molecular
Molecular biology
Genètica vegetal
Genética vegetal
Plant genetics
Fotosíntesi
Fotosíntesis
Photosynthesis
Proteïnes
Proteínas
Proteins
Ciències de la Salut
577
topic Biologia molecular
Biología molecular
Molecular biology
Genètica vegetal
Genética vegetal
Plant genetics
Fotosíntesi
Fotosíntesis
Photosynthesis
Proteïnes
Proteínas
Proteins
Ciències de la Salut
577
description Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenòmica (CRAG)
publishDate 2013
dc.date.none.fl_str_mv 2013
2013
2013
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10803/124484
url http://hdl.handle.net/10803/124484
dc.language.none.fl_str_mv Español
language_invalid_str_mv Español
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 251 p.
application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
dc.source.none.fl_str_mv TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)
reponame:TDR. Tesis Doctorales en Red
instname:CBUC, CESCA
instname_str CBUC, CESCA
reponame_str TDR. Tesis Doctorales en Red
collection TDR. Tesis Doctorales en Red
repository.name.fl_str_mv
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1869417125894946816
spelling Aislamiento y caracterización del gen de la transglutaminasa de arroz (Oryza sativa)Campos Gorgona, NefertitiBiologia molecularBiología molecularMolecular biologyGenètica vegetalGenética vegetalPlant geneticsFotosíntesiFotosíntesisPhotosynthesisProteïnesProteínasProteinsCiències de la Salut577Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenòmica (CRAG)En esta tesis se describen los resultados obtenidos en la clonación y caracterización de una nueva transglutaminasa (TGasa) vegetal aislada en arroz (Oryza sativa), la segunda transglutaminasa clonada en plantas y la primera en plantas C3. Las TGasas (E.C.2.3.2.13) son una familia de enzimas que promueven modificaciones postraduccionales de proteínas. Tienen especial importancia debido a sus implicaciones en enfermedades humanas y a sus aplicaciones biotecnológicas de interés industrial. Su investigación en plantas es aún incipiente y hasta la fecha, solo se ha clonado la TGasa cloroplástica de maíz (TGZ), a partir de una librería de ADN copia (ADNc) de plántulas de maíz. El aislamiento de la nueva transglutaminasa de arroz, descrita en esta tesis, se ha realizado a partir de ADNc y genómico. Utilizando cebadores diferenciales se realizó la clonación del gen (tgo), su inserción en un vector de expresión y su caracterización. Los análisis de la secuencia de tgo han permitido deducir que este nuevo gen está constituido por una secuencia de 1605 pb y que codifica para una proteína (TGO) de 352 aminoácidos. El análisis de la secuencia de TGO ha permitido detectar diferentes dominios relacionados con la actividad TGasa, como son la triada catalítica (Cys-His-Asp), secuencias repetidas en tándem y varios sitios de N-miristoilación. Además, otros dominios detectados, como los leucine-zipper, no eran conocidos en TGasas vegetales. La expresión de la proteína TGO en E. coli ha permitido realizar la caracterización de la enzima con respecto a diferentes parámetros. Así, mediante ensayos de actividad se ha podido confirmar la preferencia de la enzima frente a diferentes sustratos, así como su dependencia de calcio y la inhibición de su actividad frente a conocidos inhibidores de la actividad TGasa. Igualmente, la enzima fue capaz de polimerizar un sustrato in vitro y se comprobó su dependencia de la luz utilizando proteínas tilacoidales como sustrato. Éstas y otras características relevantes han permitido identificar a esta enzima como una verdadera TGasa. Finalmente, ensayos realizados con plantas de arroz para determinar su localización subcelular, así como su relación con proteínas implicadas en la fotosíntesis y su dependencia de la luz, llevan a sugerir que las funciones de TGO están asociadas a procesos fotosintéticos, probablemente relacionados con fotoprotección, al igual que ya se había descrito para la TGasa de maíz, aunque no se descartan otras funciones relacionadas.This thesis presents the results of cloning and characterization of a novel transglutaminase (TGase) from rice (Oryza sativa). This is the second transglutaminase cloned in plants and the first in C3 plants . TGases (EC2.3.2.13) are a family of enzymes that promote protein post-translational modifications. These enzymes are of particular importance because of their implication in human diseases and their biotechnological applications of industrial interest. Research on plant TGases is still incipient. To date, maize chloroplast TGase (TGZ) cloned from a DNA library is the only cloned TGase. The isolation of a new rice transglutaminase (TGO), described in this thesis, was performed using differential primers designed from both genomic and copy DNA, which has allowed the cloning of the gene (tgo), its insertion into an expression vector, and further characterization. Analysis of both the gene and protein sequences shows that this new gene is comprised of 1605 bp and encodes for a protein (TGO) of 352 amino acids. During sequence analysis different domains associated with TGase activity, such as a catalytic triad (Cys-His-Asp), tandem repeat sequences, and several N-myristoylation sites, were identified. Additionally, other domains not previously reported in plant TGases, such as a leucine-zipper domain, were observed. TGO protein expression in E. coli, allows enzyme characterization with respect to different parameters. Thus, the enzyme preference for different substrates, as well as calcium dependence and activity inhibition in the presence of known TGase inhibitors, was confirmed by these activity assays. The enzyme was able to polymerize in vitro a substrate and was also tested for light dependence using thylakoid proteins as substrate. All of these and other relevant TGO characteristics allowed the identification of this enzyme as a true TGase. Finally, studies with rice plants to determine TGO subcellular localization, as well as its relation to photosynthesis-involved proteins and light dependence, suggested that TGO functionality is associated with photosynthetic processes, probably related to photoprotection, which has already been described for maize TGase. In addition to photoprotection there are possibly additional functions that cannot be excluded.Universitat de BarcelonaSantos Lozano, MireiaTorne Cubiró, Josep M.Universitat de Barcelona. Facultat de Farmàcia201320132013info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion251 p.application/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10803/124484TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)reponame:TDR. Tesis Doctorales en Redinstname:CBUC, CESCAEspañolADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.info:eu-repo/semantics/openAccessoai:www.tdx.cat:10803/1244842026-06-14T12:46:07Z
score 15,301603

Similares en LA Referencia