Clonaje, secuenciación y localización intracelular de la isoenzima BB de la fosfoglicerato mutasa de rata
[spa] El trabajo realizado ha consistido en el clonaje y la secuenciación del CDNA de la forma B de la fosfoglicerato mutasa de rata (PGM) por una parte y en el estudio de la localización intracelular de las isoenzimas de la PGM en distintos tejidos de rata por otro. Para llevar a cabo el clonaje, h...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 1991 |
| País: | España |
| Institución: | Universidad de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de la UB |
| OAI Identifier: | oai:diposit.ub.edu:2445/182482 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/2445/182482 http://hdl.handle.net/10803/673166 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Enzims Clonatge Enzymes Cloning |
| Sumario: | [spa] El trabajo realizado ha consistido en el clonaje y la secuenciación del CDNA de la forma B de la fosfoglicerato mutasa de rata (PGM) por una parte y en el estudio de la localización intracelular de las isoenzimas de la PGM en distintos tejidos de rata por otro. Para llevar a cabo el clonaje, ha sido purificada a homogeneidad la proteína a partir de cerebro de rata, utilizando técnicas cromatográficas y obtenida pura a homogeneidad. Se han preparado los anticuerpos policlonales correspondientes en conejo. Estos anticuerpos muestran total especificidad, reconociendo una única banda por Western-Blot que corresponde al peso molecular de la subunidad de la enzima. Además, dan reacción cruzada con la otra isoenzima la forma M muscular. Los anticuerpos no se han empleado para el clonaje, pero si para los experimentos de localización intracelular. El clonaje se ha realizado utilizando como sonda el CDNA de la forma M previamente aislado por nuestro grupo. El CDNA consta de 1754 pares de bases, con una zona codificante de 762 bases que codifica para una proteína de 253 aminoácidos 96% homologa con la forma correspondiente humana. La homología a nivel de zona codificante es del 90%. EL CDNA tiene una zona no codificante 3' de 894 pares de bases que muestra una conservación con la forma humana del 64%. A nivel de Northern-Blot, este CDNA únicamente reconoce una banda del mismo peso molecular que el CDNA. Los estudios de localización intracelular se han realizado mediante experimentos de inmunocitoquímica y aislamiento de núcleos puros de distintos órganos. La inmunocitoquímica revela marcaje nuclear y citosólico en todos los órganos analizados: cerebro, hígado, corazón y musculo esquelético. Al aislar núcleos de todos estos órganos, se ha observado presencia de actividad enzimática y reacción antígeno-anticuerpo de la fosfoglicerato mutasa, confirmando los resultados de inmunocitoquímica. |
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