Análisis funcional de las proteínas ORF3a, ORF6 y Orf7a del SARS-CoV-2 en levadura
[ES] El SARS-CoV-2 (¿severe acute respiratory syndrome coronavirus 2¿) es el agente causante de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), que ha provocado una pandemia sin precedentes en todo el mundo. El gran genoma de ARN de SARS-CoV-2 contiene la información de varias proteínas accesorias. A...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Fecha de publicación: | 2021 |
| País: | España |
| Recursos: | Universitat Politècnica de València (UPV) |
| Repositorio: | RiuNet. Repositorio Institucional de la Universitat Politécnica de Valéncia |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:riunet.upv.es:10251/174705 |
| Acesso em linha: | https://riunet.upv.es/handle/10251/174705 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | COVID-19 SARS-CoV-2 Saccharomyces cerevisiae ORF accesorios Interacción virus huésped ORF3a ORF6 ORF7a. Accessory ORFs Virus-host interaction BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Máster Universitario en Biotecnología Biomédica-Màster Universitari en Biotecnologia Biomèdica |
| Resumo: | [ES] El SARS-CoV-2 (¿severe acute respiratory syndrome coronavirus 2¿) es el agente causante de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19), que ha provocado una pandemia sin precedentes en todo el mundo. El gran genoma de ARN de SARS-CoV-2 contiene la información de varias proteínas accesorias. Aunque estos pequeños ORF no son estrictamente necesarios para la infección o la replicación viral, se cree que desempeñan papeles importantes en la modulación de las funciones biológicas de las células huésped, como la respuesta al estrés o la apoptosis. Aquí investigamos las funciones biológicas de tres de las proteínas accesorias del SARS-CoV-2, ORF3a, ORF6 y ORF7a en levadura como modelo celular. Construiremos un conjunto de plásmidos para la expresión constitutiva e inducible por galactosa de cada proteína viral, tanto en un número bajo como en un alto número de copias. Las fusiones de las proteínas ORF con el epítopo flag o con GFP permitirán su detección inmunológica en extractos de levadura o su localización intracelular por microscopía de fluorescencia confocal. Los experimentos de tinción conjunta con núcleos, vacuolas, retículo endoplásmico o mitocondrias revelarán aún más los sitios intracelulares de acción de estas proteínas. El efecto de la sobreexpresión de cada ORF sobre la viabilidad, proliferación, adaptación al estrés y muerte celular apoptótica se cuantificará para las diferentes dosis. En conjunto, desarrollaremos herramientas moleculares para estudiar las funciones biológicas de las proteínas accesorias del SARS-CoV-2 para comprender mejor cómo estas proteínas manipulan las funciones internas de las células huésped. |
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