Nuevas moléculas asociadas al cáncer de ovario para la mejora de su diagnóstico y tratamiento
El cáncer de ovario (CO) es el cáncer ginecológico más letal y la quinta causa de muerte por cáncer en mujeres del mundo occidental. Debido a la inespecificidad de los síntomas y a la falta de técnicas diagnósticas eficaces, el CO es detectado en el 85% de los casos en estadio avanzado, resultando e...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2017 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/405472 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/405472 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Càncer Cáncer Cancer Ovari Ovario Ovary Exosomes Exosomas Ciències Experimentals 576 |
| Sumario: | El cáncer de ovario (CO) es el cáncer ginecológico más letal y la quinta causa de muerte por cáncer en mujeres del mundo occidental. Debido a la inespecificidad de los síntomas y a la falta de técnicas diagnósticas eficaces, el CO es detectado en el 85% de los casos en estadio avanzado, resultando en una tasa de supervivencia a 5 años del 28%. En contraste, la tasa aumenta hasta el 92% si se detecta en estadios iniciales. Por lo tanto, existe una necesidad clínica evidente de identificar nuevos biomarcadores de diagnóstico. Para ello, se propone el estudio de los exosomas del aspirado uterino (AU) – muestra poco invasiva de la cavidad uterina, próxima al ovario – como nueva fuente de biomarcadores asociados al CO. Los exosomas son vesículas extracelulares de 20-200 nm, portadoras de señales que representan las células de origen, por lo que enriquecen la muestra en moléculas con significancia fisiopatológica. Puesto que no existe un consenso en los métodos de purificación de exosomas, el primer objetivo era establecer las bases del aislamiento de exosomas a partir de AU. Para ello, se compararon tres procedimientos basados en la ultracentrifugación (Estándar – ultracentrifugación a 100.000g –, Filtración – descarta contaminantes de tamaño superior a 200 nm –, y Sacarosa – descarta contaminantes de densidad diferente a 1,13-1,19 g/mL). En el marco del descubrimiento de biomarcadores, el procedimiento Estándar resultó ser el más adecuado para aislar exosomas de AU: permitió obtener la mayor concentración de exosomas, la mayor expresión de marcadores exosomales (CD63, CD81, CD9) y la mayor reproducibilidad. Posteriormente, se optimizó el protocolo para la extracción del ARN exosomal. Tras evaluar el efecto de la sonicación y la ARNasa A en diferentes puntos del procedimiento, se determinó que la mejor estrategia era deplecionar el ARN externo a los exosomas con ARNasa A tras la ultracentrifugación, sin aplicar la sonicación. Mediante RT-qPCR se pudo detectar la expresión de miARNs y ARNms asociados a patologías del tracto genital femenino. En el marco del tratamiento del CO (cirugía citorreductora y quimioterapia basada en platino/taxano), aunque inicialmente el 80% de las pacientes de CO responden favorablemente, el 90% de ellas recaen. Dado que la diseminación metastásica del CO es la principal causa del fracaso del tratamiento, la identificación de moléculas clave en dicho proceso podría llevar al desarrollo de nuevas terapias dirigidas contra la diseminación. Por consiguiente, el segundo objetivo era identificar nuevas dianas terapéuticas para bloquear la metástasis del CO. Para ello, se realizó un microarray en el que se comparó la expresión génica de muestras pareadas de T y M de pacientes de CO. Se seleccionaron aquellos genes que se encontraban significativamente sobre-expresados en M vs T, y que además estaban asociados a supervivencia baja: FABP4, MMP11, INHBA, GREM1, MXRA5, PLVAP y PXDN. Posteriormente, se validó la sobre-expresión de estos genes en M vs T en una cohorte independiente de pacientes de CO mediante RT-qPCR. La expresión correlacionaba significativamente en las M, pero no en los T, indicando un mecanismo subyacente que debe de resultar en la activación concomitante de las correspondientes vías de señalización. Seguidamente, se analizó la expresión de los candidatos mediante inmunohistoquímica en muestras pareadas de T y M de otra cohorte independiente de pacientes de CO. FABP4 y MMP11 resultaron ser los candidatos más prometedores, pues se encontraban sobre-expresados en más del 50% de las muestras analizadas. Asimismo, se determinó que FABP4 y MMP11 eran detectables en el plasma de pacientes de CO, y su expresión era más elevada que en el plasma de pacientes control, lo cual sugiere su potencial en el diagnóstico del CO. |
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