Regulación de la expresión de versicano y su relación con la diferenciación de las células de melanoma humano

La composición de la matriz extracelular (MEC) determina algunos aspectos cruciales del comportamiento tumoral. Entre sus componentes destacan glicoproteínas y proteoglicanos (PGs), algunos de los cuales tienen receptores en la membrana celular. Nuestro grupo de investigación está interesado en la b...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Domenzain Reyna, Clelia
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2006
País:España
Institución:CBUC, CESCA
Repositorio:TDR. Tesis Doctorales en Red
OAI Identifier:oai:www.tdx.cat:10803/3558
Acceso en línea:http://www.tdx.cat/TDX-0223107-154739
http://hdl.handle.net/10803/3558
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Diferenciación
Melanoma
Versicano
Ciències de la Salut
577
Descripción
Sumario:La composición de la matriz extracelular (MEC) determina algunos aspectos cruciales del comportamiento tumoral. Entre sus componentes destacan glicoproteínas y proteoglicanos (PGs), algunos de los cuales tienen receptores en la membrana celular. Nuestro grupo de investigación está interesado en la biología de los PGs en el melanoma humano. <br/>El VS es un PG de matriz de la familia de los hialectanos. Está formado por tres dominios: G1, G2 y G3. El splicing alternativo del dominio central G2 genera cuatro isoformas denominadas V0, V1, V2 y V3. <br/>En células de melanoma humano se ha descrito la expresión de proteoglicanos como el proteoglicano específico de melanoma (mel-PG), CD44 o versicano (VS), cuya presencia fue descrita en nuestro laboratorio. Asimismo, describimos su capacidad para incrementar la proliferación y migración en células de melanoma humano, además de disminuir su adhesión. <br/>En la primera parte de este trabajo determinamos el patrón de expresión de las isoformas de VS y de mel-PG durante el proceso de desdiferenciación de las células de melanoma, utilizando líneas celulares con diferentes grados de diferenciación (temprano, intermedio y tardío). <br/>Nuestros resultados muestran que el grado de diferenciación de las células determina la expresión diferencial de VS y mel-PG, de tal forma que las líneas celulares más indiferenciadas expresan todas las isoformas de versicano y las más diferenciadas ninguna de ellas. De ello concluimos que la pérdida del estado diferenciado se acompaña de la expresión de las diferentes isoformas de VS, hecho que parece ser común en tumores derivados de células con mismo origen embrionario, como muestran nuestros análisis preliminares realizados en células de neuroblastoma y astrocitoma. <br/>Durante el proceso de diferenciación in vitro de las líneas celulares SK-mel-1.36-1-5 y SK¬mel-3.44 estos PGs desaparecen, por lo que proponemos que la producción de versicano es señal de regresión a un estado no diferenciado durante la progresión tumoral, y que existe un patrón temporal para la expresión de cada isoforma de versicano. <br/>En la segunda parte analizamos la regulación del promotor de VS en líneas celulares de melanoma humano con grados de diferenciación temprano y tardío. <br/>Aislamos, secuenciamos y clonamos el promotor de VS humano. El análisis in silico del mismo determinó tres regiones de regulación: la primera en el extremo 5', presenta dos cajas de reconocimiento para TCF-4; la segunda en la zona central, 6 cajas de unión para Sp1, 7 para AP¬2 y una para Smad3/4; y la tercera en el extremo 3', una caja de unión para AP-1. <br/>Construimos diversos mutantes de deleción diseñados para aislar el papel de cada uno de los elementos reguladores del promotor de VS y los transfectamos de manera transiente en las líneas celulares. <br/>Los resultados muestran que TCF-4 es un activador responsable de más del 50% de la actividad total de este promotor, ya que la sobrexpresión de algunos de los participantes de la vía de señalización de TCF-4 tiene un efecto directo sobre la actividad del mismo. Además, mediante ensayos de EMSA determinamos la unión específica del complejo TCF-4/?-catenina. En la región central reside aproximadamente el 10% de la actividad total del promotor y hemos determinado la unión específica a 3 de los posibles sitios de unión para Sp1. Planteamos por tanto, que Sp1 es un modulador o quizás regulador de respuesta rápida de VS. Por último, en la región 3' del promotor, que contiene la secuencia de reconocimiento para AP-1, se encuentra el 40% restante de la actividad y hemos determinado que dicha secuencia es la responsable de la actividad basal de VS.

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