Evaluación funcional de una nueva mutación intrónica en el gen KCNH2 en una familia con síndrome de QT largo : estudio en cardiomiocitos diferenciados a partir de células pluripotentes inducidas
Desde su descubrimiento, hemos sido conscientes de las potenciales aplicaciones de las células madre pluripotentes inducidas (iPSCs). Si bien la utilización de células madre pluripotentes embrionarias humanas (hESCs) puede considerarse limitada principalmente por su repercusión ética, con el descubr...
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| Tipo de documento: | tese |
| Data de publicação: | 2022 |
| País: | España |
| Recursos: | Universidad Complutense de Madrid (UCM) |
| Repositório: | Docta Complutense |
| Idioma: | espanhol |
| OAI Identifier: | oai:docta.ucm.es:20.500.14352/3893 |
| Acesso em linha: | https://hdl.handle.net/20.500.14352/3893 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | 611.013.9(043.2) Celulas madre Stem cells Anatomía 2410.02 Anatomía Humana |
| Resumo: | Desde su descubrimiento, hemos sido conscientes de las potenciales aplicaciones de las células madre pluripotentes inducidas (iPSCs). Si bien la utilización de células madre pluripotentes embrionarias humanas (hESCs) puede considerarse limitada principalmente por su repercusión ética, con el descubrimiento de las iPSCs se eliminó la limitación que la ética imponía a la explotación de la característica más importante de estos tipos celulares: la pluripotencia. Las iPSCs constituyen una fuente inagotable de células pluripotentes que poder diferenciar en cualquier tipo celular adulto, con las aplicaciones de tan elevada consideración que esto supone. Aunque aún nos encontramos lejos de su utilización en medicina regenerativa, de su uso para la obtención de tejidos u órganos que sustituyan tejidos u órganos afuncionales como resultado del padecimiento de una patología cualquiera, su utilización para el modelado in vitro de enfermedades se encuentra en auge, y es que, a día de hoy, son numerosas las enfermedades de las que se dispone de modelos in vitro basados en iPSCs. Cultivos celulares con los que poder vislumbrar los mecanismos moleculares que subyacen a una patología, con los que poder comprender enfermedades y con los que poder someter a ensayo tratamientos farmacológicos prescindiendo del uso de modelos animales, incluso en modelos paciente-específicos. Éste es el fin último de la presente tesis, de una tesis que engloba los caminos a recorrer desde la obtención de una fuente de células adultas para la generación de una línea de hiPSCs estable, a la generación de un modelo in vitro de una patología concreta, el síndrome de QT largo de tipo 2 (SQTL2).Para ello, en primer lugar, procedimos con el aislamiento de fibroblastos de muestras de piel de un paciente varón con SQTL2 portador de una mutación en el gen KCNH2 y de una mujer sana emparentada con el mismo (sobrina), que reprogramamos para la generación de hiPSCs a partir de la expresión ectópica de los genes OCT4, SOX2, KLF4 y c-MYC (factores de Yamanaka), introducidos mediante un sistema de transporte viral.Por último, diferenciamos las hiPSCs obtenidas, y previamente caracterizadas, en cardiomyocyte like cells (CLCs), cuya expresión génica y electrofisiología analizamos minuciosamente, y en comparación con CLCs sanas que utilizamos como control, para determinar la consecución de un modelo in vitro de SQTL2, es decir, la existencia de diferencias in vitro que se pudieran asociar particularmente a mutaciones en el gen KCNH2. |
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