Protecció del procés de mort cel·lular programada en cultius in vitro de cèl·lules animals
Davant la impossibilitat econòmica i física de controlar enginyerilment tots els paràmetres involucrats en la pèrdua de viabilitat en cultius in vitro de cèl·lules animals quan es dóna una limitació en el subministrament de nutrients, així com per la presència d'elevades concentracions de subpr...
| Autor: | |
|---|---|
| Formato: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2002 |
| País: | España |
| Recursos: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/5298 |
| Acesso em linha: | http://www.tdx.cat/TDX-0712102-100146 http://hdl.handle.net/10803/5298 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | Hibridoma Bioreactor Apoptosi Tecnologies 577 |
| Resumo: | Davant la impossibilitat econòmica i física de controlar enginyerilment tots els paràmetres involucrats en la pèrdua de viabilitat en cultius in vitro de cèl·lules animals quan es dóna una limitació en el subministrament de nutrients, així com per la presència d'elevades concentracions de subproductes tòxics del metabolisme, en aquest treball s'ha explorat la modificació tant de la formulació del medi com genètica de cèl·lules d'hibridoma amb l'objectiu de perllongar la seva supervivència dins els bioreactors i rendibilitzar el procés d'obtenció d'anticossos monoclonals. <br/>La reformulació del medi va permetre alentir la proliferació cel·lular i retardar l'exhauriment de nutrients essencials. Tanmateix, aquests canvis induïen la mort cel·lular per apoptosi.<br/>El bloqueig de l'apoptosi mitjançant l'ús d'inhibidors peptídics específics de Caspases va permetre no només retardar la pèrdua de viabilitat dels cultius si no també recuperar-los 36 hores després d'haver induït la mort per manca de glutamina. <br/>Resultats similars es van obtenir en la inhibició genètica de l'activació de les Caspases sobreexpressant gens protectors de la família de Bcl-2, tant d'origen endogen com víric. A més a més, els cultius d'aquestes noves línies cel·lulars d'hibridoma poden ser recuperats després d'haver estat sotmesos fins a 48 hores sota condicions inductores de l'apoptosi.<br/>Aquests resultats demostren la viabilitat d'incorporar una vàlvula de seguretat genètica que permet retardar el procés de mort per apoptosi de cèl·lules que, en altres circumstàncies, moririen i s'acumularien en el bioreactor. A més a més, la sobreexpressió de gens antiapoptòtics fa les cèl·lules més resistents i permet recuperar cultius que, per causes accidentals inherents a la metodologia emprada en el monitoratge i control del bioprocés o per limitacions físiques de subministrament de nutrients, factors de creixement i oxigen, es vegin sotmeses a condicions inductores de l'apoptosi. <br/>D'aquesta manera, aquest treball de tesi contribueix a la creació d'un sistema de cultiu més robust que evitaria l'enorme pèrdua de rendibilitat en els processos d'obtenció del producte desitjat quan els cultius entren en la fase de mort per apoptosi |
|---|