Desarrollo de nuevas herramientas para el diagnóstico y control de la infección por el virus West Nile (Nilo Occidental)

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 01-02-2019

Bibliographic Details
Author: Rebollo Polo, Belén
Format: doctoral thesis
Publication Date:2019
Country:España
Institution:Universidad Autónoma de Madrid
Repository:Biblos-e Archivo. Repositorio Institucional de la UAM
Language:Spanish
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Online Access:http://hdl.handle.net/10486/687194
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Anticuerpos y antígenos - Tesis doctorales
Inmunología veterinaria - Tesis doctorales
Vacunas - Tesis doctorales
Biología y Biomedicina / Biología
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Venteo Moreno, Angel
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Como punto de partida de los diferentes trabajos realizados se obtuvieron los reactivos necesarios para emprender dichos desarrollos, la proteína recombinante no estructural NS1 del WNV y la región estructural completa expresada en forma de cápsida vacía, o “virus-like particle” (VLP). Con estos reactivos se establecieron y ensayaron diversas metodologías de potencial utilidad en el diagnóstico y control de la enfermedad producida por el WNV. En primer lugar, se evaluó la antigenicidad de las VLP obtenidas con el fin de comprobar si podían representar alternativas viables a los antígenos utilizados en la actualidad en los ensayos diagnósticos, resultando aptas para tal fin en los ensayos realizados. En segundo lugar se estudió la respuesta inmune a la proteína NS1 en caballos, comparada con la respuesta a proteínas estructurales en forma de VLP, mediante la técnica de ELISA, con el fin de explorar métodos que permitan diferenciar a través del análisis serológico animales vacunados de infectados. Para ello se analizó un amplio grupo de sueros de caballo de diferentes procedencias geográficas, infectados o vacunados con diferentes tipos de vacunas, tanto de campo como experimentales. Los resultados mostraron que la diferenciación mediante el sistema ensayado es posible en animales vacunados e infectados en condiciones controladas, pero no es tan eficaz en las condiciones prevalentes en el campo. En tercer lugar se puso a prueba la inmunogenicidad y capacidad inmunoprofiláctica de la NS1 en un modelo de hospedador natural, la perdiz roja, resultando en un inesperado efecto de exacerbación de la infección. Finalmente, el último estudio de esta Tesis abordó la evaluación del anticuerpo monoclonal 1D11, generado en el laboratorio en estudios anteriores, como reactivo para la inmunodetección de un amplio rango de variantes del WNV, utilizando para ello técnicas inmunocromatográficas. Los resultados revelaron que el mAb 1D11 puede detectar WNV de todos los linajes ensayados, y diferenciarlo de otros flavivirus relacionados, lo que apunta al 1D11 como inmunoreactivo eficaz para la detección universal del WNV.West Nile virus (WNV) is currently one of the most remarkable emerging pathogens due to its recent geographical expansion and its importance in public health, animal health and the environment. This Doctoral Thesis deals with the development of useful tools in the diagnosis, surveillance and control of the infection produced by this virus. As a starting point for the different works carried out, the necessary reagents were obtained to undertake these developments, the WNV non-structural recombinant protein NS1 and the complete WNV structural region expressed in the form of an empty capsid, or "virus-like particle" (VLP). Several methodologies potentially useful in the diagnosis and control of the disease produced by WNV were established and tested with these reagents. First, the antigenicity of the VLP obtained was evaluated in order to verify if they could represent viable alternatives to the antigens used in the diagnostic tests, being suitable for this purpose in the tests carried out. Secondly, the immune response to the NS1 protein in horses was compared with the response to structural proteins in VLP form by means of ELISA techniques in order to explore methods for differentiating vaccinated from infected animals through serological analysis. To do this, a large group of horses’ sera from different geographical origins, infected or vaccinated with different types of vaccines, both in the field and experimentally, were analyzed. The results showed that differentiation using the system under study is possible between vaccinated and infected animals under controlled conditions, but it is not as effective in the conditions prevailing in the field. Third, the immunogenicity and immunoprophylactic capacity of NS1 was tested in a natural host model, the red-legged partridge, resulting in an unexpected exacerbation of the infection. Finally, the last study of this Thesis addressed the evaluation of monoclonal antibody 1D11, generated in the laboratory in previous studies, as a reagent for the immunodetection of a wide range of WNV variants, using immunochromatographic techniques. The results revealed that the mAb 1D11 can detect all tested WNV lineages, and differentiate this virus from other related flaviviruses, which points to 1D11 as an effective immune reagent for the universal detection of WNV.Parte de la investigación realizada en esta tesis ha sido financiada por el proyecto: EuroWestNile (Ref: EU HEALTH.2010.2.3-3- 261391)Jiménez Clavero, Miguel AngelVenteo Moreno, AngelDepartamento de Biología MolecularDepartamento de GeografíaFacultad de CienciasINGENASAINIA. Centro de Investigación de Sanidad Animal (CISA)20192019-02-01doctoral thesishttp://purl.org/coar/resource_type/c_db06NAhttp://purl.org/coar/version/c_be7fb7dd8ff6fe43info:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10486/687194reponame:Biblos-e Archivo. Repositorio Institucional de la UAMinstname:Universidad Autónoma de MadridEspañolspaopen accesshttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2info:eu-repo/semantics/openAccessoai:repositorio.uam.es:10486/6871942026-06-23T12:46:27Z
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