Inmunomodulació de la vía Th17 con vectores virales portadores del receptor soluble de IL23: una nueva estrategia de terapia génica para el tratamiento de sclerosis múltiple
En las últimas décadas, la incidencia de enfermedades autoinmunes ha aumentado notablemente, ya sea por el mayor conocimiento, por la mejora en las herramientas de diagnóstico, o por los cambios en los hábitos de vida. Así, el incremento de afectados por este tipo de enfermedades se ha convertido en...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/283733 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/283733 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | IL23 Th17 EAE Ciències de la Salut 577 |
| Sumario: | En las últimas décadas, la incidencia de enfermedades autoinmunes ha aumentado notablemente, ya sea por el mayor conocimiento, por la mejora en las herramientas de diagnóstico, o por los cambios en los hábitos de vida. Así, el incremento de afectados por este tipo de enfermedades se ha convertido en un problema social grave, pues trastornos autoinmunes crónicos como la Esclerosis Múltiple (EM) o la Enfermedad de Crohn (EC) pueden aparecer en etapas tempranas de la vida, afectando gravemente a su calidad. Más aún, los tratamientos actuales contra estas enfermedades son paliativos y frenan levemente su desarrollo, sin lograr evitar su transcurso a largo plazo, y provocando efectos secundarios graves muchas veces. Por otro lado, el coste de los medicamentos y los cuidados multidisciplinares que los pacientes requieren a lo largo de su vida constituyen un problema económico-sanitario elevado, haciendo cada vez más importante la aparición de una cura eficaz. La EC es una enfermedad inflamatoria intestinal grave que afecta especialmente al colon y al íleo, además de tener otras complicaciones sistémicas y extraintestinales. Por su parte, la EM es una enfermedad desmielinizante que afecta al SNC provocando una pérdida progresiva de la movilidad y otras complicaciones secundarias. En ambas enfermedades juega un papel muy importante la vía Th17, y por consiguiente, la IL23. De hecho, algunos tratamientos experimentales para ambas tratan de inhibir la función de IL23 mediante el uso de anticuerpos, con resultados controvertidos. Así pues, en este trabajo nos propusimos estudiar una estrategia de terapia génica no basada en el uso de anticuerpos, sino en un vector viral portador de IL23R soluble (IL23Rs), que se uniera a IL23 y redujera su acción. En la primera parte, nos centramos en la EC y en la obtención del vector viral idóneo para terapia intestinal. El adenovirus quimera Ad5/40S, con un marcado tropismo intestinal cumple estos requisitos. Sin embargo, su producción in vitro era muy ineficiente, por lo que se desarrolló un método optimizado de producción, basado en el uso de células 211B en suspensión y polybrene durante las infecciones en el proceso de amplificación viral. Por otra parte, también se realizaron dos estudios de tropismo con diferentes vectores virales: in vitro en linfocitos T CD4+, demostrando que el Ad5/40S es el vector que mejor infecta, e in vivo, estudiando el tropismo celular en intestino y demostrando que ninguno de los vectores virales infecta eficientemente las stem cells de las criptas de Lieberkühn. Debido a que no obtuvimos un perfil Th17 en el modelo de colitis inducida por DSS, en la segunda parte del trabajo nos centramos en la EM. Primeramente, se diseñó el IL23Rs murino, que fue clonado en diferentes vectores virales. Seguidamente, se demostró que células infectadas con estos vectores secretaban IL23Rs al exterior celular y que IL23Rs se unía a IL23 in vitro. Finalmente, los vectores portadores de IL23Rs se probaron en un modelo murino de EM, la Encefalomielitis Autoinmune Experimental. Los resultados expuestos en este trabajo indican que la expresión de IL23Rs tiene un efecto beneficioso en la evolución clínica de la enfermedad, retrasando la aparición de los primeros síntomas y reduciendo la gravedad de los mismos hasta el final del seguimiento clínico. Asimismo, en concordancia con la mejora clínica observada, los ratones tratados no presentan evidencias de desmielinización, además de tener una menor inflamación y una respuesta astroglial y microglial significativamente menor en médula espinal. En resumen, nuestros resultados sugieren que el empleo de una terapia génica inmunomoduladora para EM basada en el uso de vectores virales portadores de IL23Rs podría tener un efecto terapéutico en el desarrollo de la enfermedad. |
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