Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare

Tesi realitzada a l'Institut d'Investigacions Biomèdiques de Barcelona (IIBB-CSIC IDIBAPS)

Detalles Bibliográficos
Autor: Ventayol Espinazo, Marina
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2013
País:España
Institución:Universidad de Barcelona
Repositorio:Dipòsit Digital de la UB
OAI Identifier:oai:diposit.ub.edu:2445/43154
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/2445/43154
http://hdl.handle.net/10803/109374
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Micro RNAs
Cèl·lules mare
Diferenciació cel·lular
Epiteli
MicroRNAs
Stem cells
Cell diferentiation
Epithelium
id ES_5b0a85ea3ea2b3d8ae244aac6aaa006a
oai_identifier_str oai:diposit.ub.edu:2445/43154
network_acronym_str ES
network_name_str España
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
title Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
spellingShingle Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
Ventayol Espinazo, Marina
Micro RNAs
Cèl·lules mare
Diferenciació cel·lular
Epiteli
MicroRNAs
Stem cells
Cell diferentiation
Epithelium
title_short Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
title_full Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
title_fullStr Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
title_full_unstemmed Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
title_sort Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mare
dc.creator.none.fl_str_mv Ventayol Espinazo, Marina
author Ventayol Espinazo, Marina
author_facet Ventayol Espinazo, Marina
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Viñas Muñoz, José Luis
Hotter Corripio, Georgina
Palacios, Luis
Universitat de Barcelona. Facultat de Biologia
dc.subject.none.fl_str_mv Micro RNAs
Cèl·lules mare
Diferenciació cel·lular
Epiteli
MicroRNAs
Stem cells
Cell diferentiation
Epithelium
topic Micro RNAs
Cèl·lules mare
Diferenciació cel·lular
Epiteli
MicroRNAs
Stem cells
Cell diferentiation
Epithelium
description Tesi realitzada a l'Institut d'Investigacions Biomèdiques de Barcelona (IIBB-CSIC IDIBAPS)
publishDate 2013
dc.date.none.fl_str_mv 2013
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv https://hdl.handle.net/2445/43154
http://hdl.handle.net/10803/109374
url https://hdl.handle.net/2445/43154
http://hdl.handle.net/10803/109374
dc.language.none.fl_str_mv Catalán
language_invalid_str_mv Catalán
dc.rights.none.fl_str_mv (c) Ventayol Espinazo, 2013
info:eu-repo/semantics/openAccess
rights_invalid_str_mv (c) Ventayol Espinazo, 2013
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
dc.source.none.fl_str_mv Tesis Doctorals - Facultat - Biologia
reponame:Dipòsit Digital de la UB
instname:Universidad de Barcelona
instname_str Universidad de Barcelona
reponame_str Dipòsit Digital de la UB
collection Dipòsit Digital de la UB
repository.name.fl_str_mv
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1869408766690066432
spelling Paper del miRNA en la diferenciació de les cèl·lules mareVentayol Espinazo, MarinaMicro RNAsCèl·lules mareDiferenciació cel·lularEpiteliMicroRNAsStem cellsCell diferentiationEpitheliumTesi realitzada a l'Institut d'Investigacions Biomèdiques de Barcelona (IIBB-CSIC IDIBAPS)[cat] Les patologies renals s’han convertit en una problemàtica a nivell mundial, en l’actualitat poden afectar a una de cada 9 persones al llarg de la seva vida i porten associats elevats costos econòmics. Malgrat els últims avenços científics i millores en el tractament d’aquestes patologies, el transplantament renal i la diàlisi continuen sent les dues úniques opcions terapèutiques efectives en el tractament de la insuficiencia renal. La regeneració de l’epiteli renal és determinant en la recuperació del pacient ja que determina que es pugui restablir la funcionalitat d’aquest òrgan. L’obtenció de precursors renals a partir de cèl•lules mare que puguin integrar-se i regenerar el ronyó lesionat s’ha convertit en una àrea de recerca biomèdica molt important. L'objecte d’estudi d’aquesta tesi va ser conèixer els mecanismes involucrats en la diferenciació de les cèl·lules mare embrionàries (ESCs) i les cèl·lules mare adiposes (ASCS) cap al llinatge epitelial renal ja que aquestes cèl•lules poden ser una potencial font d’aquests precursors renals amb capacitat regenerativa. Recentment s’ha descobert que els miRNAs, que tenen la funció de regular l’expressió gènica en l’etapa post-transcripcional, són essencials en la diferenciació de les cèl•lules mare i s’han trobat miRNAs específics que regulen la diferenciació a un llinatge cel·lular en concret. En aquest sentit, el nostre objectiu general en aquest treball va ser estudiar el paper dels miRNAs en la diferenciació de cèl•lules mare a progenitors epitelials renals. Per això, primer de tot es van realitzar experiments de diferenciació en que els cossos embrionaris (EBs) induïts a partir de les cèl•lules mare embrionàries (ESCs) es van cultivar amb un medi de cultiu suplementat amb all-trans-retinoic acid (ATRA) i activina A, i les cèl•lules mare adiposes (ASCs) amb un medi amb una concentració fisiológica de glucosa suplementat amb ATRA. Amb aquests protocols de diferenciació, es van obtenir cèl•lules amb característiques de progenitors renals. Els EBs cultivats amb el protocol de diferenciació expressaven els marcadors de l’organogènesi renal inicial (Pax2, WT1, Wnt4, Notch2 i Wnt9b). Les ASCs cultivades amb ATRA varen canviar la seva morfologia a una morfologia epitelial i van expressar marcadors tant de l’organogènesi renal inicial (Pax2, WT1, Wnt4, Six2 i Megalina) com els marcadors epitelials (Citoqueratina 18, E-caderina). Un anàlisis de miRNAs va demostrar que la família de miRNAs let-7 es sobreexpressava durant la diferenciació dels EBs i que el miRNA let-7e més concretament era essencial en l’expressió dels marcadors Pax2, Wt1i Wnt4 ja que la seva silenciació disminuïa l’expressió d’aquests gens. En les ASCs, en canvi, es va demostrar que el miRNA let-7e també augmentava en la diferenciació i que a més tenia característiques d’inductor de la diferenciació, essent essencial en l’expressió tant dels marcadors de l’organogènesi renal (Pax2, Wt1, Wnt4, Megalina) com del marcador epitelial CK18. Profunditzant en el paper del miRNA let-7e en la diferenciació, es va demostrar amb experiments de Western blot, que el miRNA let-7e modula els nivells de β-catenina a través d’un mecanisme que implica la inhibició de la PKCβ i la conseqüent disminució en la fosforilació de la GSK3β (Ser-9) i que això és imprescindible per la correcta diferenciació de les ESCs. Per altra banda, en les ASCs es va demostrar utilitzant l’assaig del gen reporter de la luciderasa, que el miRNA let-7e inhibeix directament l’expressió de la metal•loproteinasa 9 i que d’aquesta manera modula la diferenciació de les ASCs al llinatge epitelial renal.[eng] Role of miRNA in stem cell differentiation Renal diseases have become a worldwide problem that can affect one in nine people throughout their life. Despite recent scientific advances, kidney transplantation and dialysis are still the only two effective therapeutic options in renal failure. The regeneration of the epithelium is critical for patient recovery as it determines the restoration of the kidney functionality. Cell precursors obtained from renal stem cells that can regenerate and integrate the injured kidney have become an important research area. The aim of our study was to determine the mechanisms involved in the differentiation of embryonic stem cells (ESCs) and adipose stem cells (ASCs) to renal epithelial lineage as these cells can be a source of these renal precursors with regenerative potential. It was recently discovered that miRNAs, which have the function of regulating gene expression in the post-transcriptional level, are essential in the differentiation of stem cells. In this sense, our main objective was to study the role of miRNAs in stem cells differentiation to renal epithelial progenitors. For this purpose, We have carried out experiments of stem cells differentiation. Embryoid bodies (EBs) from ESCs were cultured with activin A and ATRA and ASCs where cultured in a medium with physiological concentration of glucose supplemented with ATRA, obtaining progenitor cells with renal epithelial characteristics. EBs expressed the early kidney organogenesis markers (Pax2, WT1, Wnt4, Notch2 Wnt9b) and ASCs changed their morphology to a more epithelial one and expressed both markers of kidney organogenesis (Pax2, WT1, Wnt4, SIX2 i Megalin) and epithelial markers (cytokeratin-18 and E-cadherin). Furthermore, miRNA analysis and the subsequent overexpression and silencing of the miRNA let-7e in stem cells, demonstrates that this miRNA has characteristics of differentiation inductor and that is essential in the expression of both kidney organogenesis markers and epithelial markers. Furthermore, the ESCs, let-7e miRNA modulates β-catenin levels through a mechanism involving inhibition of PKCβ and the consequent decrease in the phosphorylation of GSK3 (Ser-9). Moreover, it was demonstrated using the luciferase assay, that the miRNA let-7e directly inhibits expression of gelatinase B (MMP9) in ASCs and thereby modulates its renal epithelial differentiation.Universitat de BarcelonaViñas Muñoz, José LuisHotter Corripio, GeorginaPalacios, LuisUniversitat de Barcelona. Facultat de Biologia2013info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionapplication/pdfhttps://hdl.handle.net/2445/43154http://hdl.handle.net/10803/109374Tesis Doctorals - Facultat - Biologiareponame:Dipòsit Digital de la UBinstname:Universidad de BarcelonaCatalán(c) Ventayol Espinazo, 2013info:eu-repo/semantics/openAccessoai:diposit.ub.edu:2445/431542026-05-27T06:46:51Z
score 15,300719

Similares en LA Referencia