Chemically synthesized peptide libraries as a new source of BBB-shuttles. Use of Mass Spectrometry for peptide identification and quantification
[cat] La barrera hematoencefàlica (BH) és una barrera biològica situada als capil.lars sanguinis del cervell que juga un paper crucial per a la regulació del flux d'entrada i sortida de molècules necessàries pel correcte funcionament d'aquest òrgan i per a la seva protecció davant d'a...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | España |
| Institución: | Universidad de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de la UB |
| OAI Identifier: | oai:diposit.ub.edu:2445/58032 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/2445/58032 http://hdl.handle.net/10803/279348 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Ciències de la salut Síntesi de pèptids Espectrometria de masses Bacteriòfags Receptors cel·lulars Medical sciences Peptide synthesis Mass spectrometry Bacteriophages Cell receptors |
| Sumario: | [cat] La barrera hematoencefàlica (BH) és una barrera biològica situada als capil.lars sanguinis del cervell que juga un paper crucial per a la regulació del flux d'entrada i sortida de molècules necessàries pel correcte funcionament d'aquest òrgan i per a la seva protecció davant d'agents neurotòxics. Aquesta forta regulació dificulta el pas a través de la BH dels fàrmacs dirigits al parènquima cerebral. Per superar aquest obstacle, s'han proposat estratègies com l'ús de llançadores de la BH. Aquestes es descriuen com a molècules tant capaços de travessar la BH com capaces d'assistir el pas d'una molècula incapaç de creuar la barrera enganxada a ella. Aquesta tesi es centra en l'estudi i la modificació de llançadores de la BH ja descrites per millorar la seva eficàcia, estabilitat i solubilitat i en la recerca de nous pèptids llançadora per mètodes de cribratge d'alt rendiment. Es va sintetitzar una biblioteca d'estereoisòmers basada en Ac-(N-MePhe)(4)-NH(2) per avaluar el paper de la quiralitat en la difusió passiva a través d'un assaig de transport in vitro: PAMPA. A més, es va dissenyar i sintetitzar una biblioteca de 21 anàlegs basats en Ac-HAIYPRH-NH(2) per millorar l'eficàcia, l'estabilitat i la solubilitat d'aquest pèptid a través d'un assaig in vitro de BH basat en un co-cultiu cel.lular. La tècnica de cribratge d'alt rendiment phoge disploy es va utilitzar per explorar unitats peptídiques mínimes capaços de dirigir-se preferentment al cervell. Es va sintetitzar una biblioteca de fags CX3C i es va assajar in vivo en ratolins BALB/c. Els fags CFLFC, CRWEC i CNSQC van ser seleccionats després d'un protocol de la panning compost de 3 rondes basades en enriquiment al cervell. S'ha desenvolupat una nova metodologia de selecció d'alt rendiment per buscar nous pèptids llançadora de la BH, en un espai químic no disponible amb la tècnica phoge disploy. Aquesta metodologia combina la química combinatòria per a la síntesi de biblioteques de pèptids, els models in vitro que mimetitzen la BH per a l'avaluació de les biblioteques i tècniques avançades d'espectrometria de masses per a la identificació dels pèptids capaços de travessar aquests assajos in vitro. |
|---|