Efecto de la criopreservación sobre la estructura del huso meiótico de ovocitos humanos madurados in vitro
La presente tesis analiza el efecto de un protocolo de frecuente aplicación clínica (de congelación lenta y descongelación rápida, utilizando 1,2 propanediol y sacarosa como crioprotectores) sobre la supervivencia, la capacidad de maduración in vitro y la estructura del huso meiótico de ovocitos hum...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2001 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/3739 |
| Acceso en línea: | http://www.tdx.cat/TDX-1030103-171735 http://hdl.handle.net/10803/3739 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Criopreservación Huso meiótico Ovacitos Ciències Experimentals 576 |
| Sumario: | La presente tesis analiza el efecto de un protocolo de frecuente aplicación clínica (de congelación lenta y descongelación rápida, utilizando 1,2 propanediol y sacarosa como crioprotectores) sobre la supervivencia, la capacidad de maduración in vitro y la estructura del huso meiótico de ovocitos humanos, congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II. Para llevarlo a cabo se plantearon los siguientes objetivos parciales:<br/>a) Desarrollar y validar un modelo de estudio a partir de ovocitos madurados in vitro. Este estudio ha permitido demostrar mediante análisis citogénetico y de FISH que la maduración in vitro de ovocitos no induce per se un incremento de la tasa de aneuploidías, por tanto que los ovocitos madurados in vitro constituyen un modelo válido de estudio.<br/>b) Determinar la capacidad de maduración in vitro de los ovocitos de cada uno de los grupos experimentales. El cultivo in vitro de ovocitos se realizó en líquido folicular proveniente de folículos estimulados. En este estudio no se observaron diferencias en la tasa de maduración ni diferencias en el tiempo de cultivo requerido para alcanzar el estadío de metafase II en los ovocitos asignados a los distintos grupos experimentales. <br/>c) Determinar la tasa de supervivencia de ovocitos humanos congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II al proceso de congelación-descongelación.<br/>Este estudio ha demostrado que los ovocitos congelados en estadío de vesícula germinal son desde el punto de vista morfológico más resistentes al daño crioinducido que los ovocitos criopreservados en metafase II. En ambos casos se observan tasas de supervivencia elevadas, comparables a las publicadas en la bibliografía anteriormente. También se ha demostrado que el proceso de criopreservación en estadío de vesícula germinal no afecta la capacidad de los ovocitos para reiniciar la progresión meiótica hasta metafase II, ya que no se han detectado diferencias significativas en el tiempo requerido para la extrusión del primer corpúsculo polar antes y después de la congelación, ni en las respectivas tasas de maduración. <br/>d) Determinar la estructura del huso meiótico en ovocitos humanos congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II comparándola con la de ovocitos no criopreservados, para lo que se desarrolló una técnica de tinción inmunocitoquímica del huso meiótico.<br/>Este estudio ha permitido determinar que la mayoría de los ovocitos en metafase II madurados in vitro (no sometidos a ningún tratamiento experimental) y analizados mediante microscopía confocal, presenta un huso de morfología normal.<br/>En contra de la hipótesis inicial en este estudio se ha determinado que la criopreservación de ovocitos en vesícula germinal no representa una ventaja respecto a la criopreservación de ovocitos en metafase II en lo que se refiere a la preservación de la integridad estructural del huso meiótico. La congelación tiene un efecto deletéreo sobre la estructura del huso meiótico de los ovocitos congelados en vesícula germinal, siendo la tasa de ovocitos con aberraciones estructurales del huso relativamente baja mientras que en un elevado porcentaje de ovocitos no se detectan microtúbulos de tubulina polimerizada. El efecto deletéreo de la congelación en los ovocitos criopreservados en este estadío afecta también a las carácterísticas morfológicas de los cromosomas y su distribución en la placa metafásica. La congelación tiene un efecto deletéreo sobre la estructura del huso meiótico de los ovocitos congelados en metafase II. Las anomalías incluyen un elevado porcentaje de ovocitos en los que no se detectan microtúbulos de tubulina polimerizada, y una tasa de ovocitos con aberraciones estructurales del huso relativamente baja. En los casos en que se observa ausencia del huso, los cromosomas forman un grupo no siempre ordenado y no se observan cromosomas aislados en el citoplasma. |
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