Role of EPHA3 in colorectal cancer
Los receptores EPH (receptores de efrina) constituyen la subfamilia más grande de los receptores tirosina quinasas en mamífero. Se unen a las efrinas, ancladas a las membranas celulares mediante un enlace glicosilfosfatidilinositol (GPI) (efrinas de tipo A) o mediante una dominio transmembrana segui...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2015 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de Documents de la UAB |
| Idioma: | inglés |
| OAI Identifier: | oai:ddd.uab.cat:148977 |
| Acceso en línea: | https://ddd.uab.cat/record/148977 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Còlon Recte Proteïna tirosina-quinasa |
| Sumario: | Los receptores EPH (receptores de efrina) constituyen la subfamilia más grande de los receptores tirosina quinasas en mamífero. Se unen a las efrinas, ancladas a las membranas celulares mediante un enlace glicosilfosfatidilinositol (GPI) (efrinas de tipo A) o mediante una dominio transmembrana seguido por un dominio citoplasmático (efrinas de tipo B). El complejo receptor-ligando activa una cascada de señalización tanto en las células que expresan los receptores EPH como en las células adyacentes, que expresan las efrinas. Este mecanismo se denomina "forward" y "reverse signalling", respectivamente. La interacción entre receptor y su ligando puede desencadenar una amplia gama de respuestas celulares incluyendo la adhesión, repulsión y la segregación/posicionamiento celular durante la separación de los tejidos en las primeras fases de desarrollo embrionario. Los mecanismos que regulan estas distintas respuestas dependen en gran medida del tipo celular y del tejido. Aunque, los receptores EPH han sido ampliamente caracterizados para sus funciones durante el desarrollo embrionario, se encuentran re-expresados en una variedad de tumores malignos humanos. No obstante, dependiendo del tipo de tumor, de su estadio y de la actividad quinasa, los receptores EPH pueden actuar induciendo o inhibiendo la progresión del cáncer. Los receptores EPH de tipo B están involucrados en la homeostasis del epitelio intestinal y la pérdida de función de estos receptores es un evento clave en la progresión del cáncer de colon, sobretodo de adenoma a carcinoma. El receptor EPHA3, identificado y aislado por primera vez ellas membranas de células pre-B de leucemia linfoblástica aguda, se encuentra ampliamente expresado durante el desarrollo embrionario, particularmente en el tejido nervioso y corazón. Tal como se espera de su primera identificación, se ha demostrado que también está involucrado en muchos tipos de cáncer. Los efectos inactivantes de distintas mutaciones somáticas encontradas en varios tipos de cáncer, sugieren fuertemente que la proteína EPHA3 suprime las propiedades de las células cancerígenas a través un mecanismo que dependería de su unión con la efrina y de su actividad quinasa. Dos estudios independientes de secuenciación de ADN empleando técnicas de nueva generación, descubrieron una alta frecuencia de mutaciones en EPHA3 en una amplia cohorte de tumores de colon humano y, más importante, la mayoría de estas mutaciones se descubrieron afectar la actividad quinasa o el dominio de unión con el ligando. Sin embargo, la función de EPHA3 en la tumorigenesis intestinal no ha sido investigada a fondo. Por lo tanto, en este estudio se utilizaron dos líneas celulares de cáncer de colon humano, LS174 y DLD1, para sobre-expresar de forma inducible por doxiciclina el receptor EPHA3. Hemos observado que la reintroducción de EPHA3 en líneas de cáncer de colon no afecta el crecimiento de las células cultivadas en sustratos sólidos, en medio semi-solido (soft-agar) o como xenotrasplantes en ratones inmunodeprimidos. Además, se utilizó un modelo transgénico de ratón en el que el gen EphA3 ha sido suprimido y descubrimos que la inactivación específica de uno o los dos alelos de este gen no inicia el proceso tumorígenico en el intestino de los ratones. Tampoco observamos cambios en el tamaño o en el número de tumores intestinales en ratones donde la tumorigenesis intestinal se inició genéticamente (modelo de ratón Apcmin/+) o farmacológicamente (tratamiento con azoximetano). También hemos observado que la sobreexpresión de EPHA3 en células de cáncer de colon no afecta su capacidad de migración o de invasión en ensayos in vitro. Para profundizar el papel de EPHA3 en el proceso metastático, se usó un modelo murino de metástasis de pulmón observando que la reintroducción de EPHA3 en células de cáncer de colon inyectadas en las colas de ratones inmunodeprimidos no altera su capacidad migratoria y de generar metástasis en otros órganos in vivo. Estos resultados confirman los datos de inmunhistoquimica donde observamos ausencia de diferencias en los niveles de tinción de EPHA3 en los nódulos linfáticos respeto a los tumores primarios de pacientes con cáncer colorrectal localmente avanzado (estadio Dukes C). Por último, el análisis inmuhistoquimico de los niveles de tinción de EPHA3 en pacientes con cáncer colorrectal (estadio Dukes C) no reveló ninguna correlación con la supervivencia y otras características clinicopatologicas de estos pacientes. En conclusión, en este estudio, reportamos que el mecanismo de señalización quinasa dependiente del receptor EPHA3, aunque está frecuentemente inactivado en cáncer colorrectal, no juega un papel como supresor de la tumorigenesis intestinal durante ningún estadio de la progresión del tumor, tanto in vitro como in vivo. Estos resultados, esclarecen el papel de EPHA3 en cáncer colorrectal y evidencian la importancia de estudios funcionales para confirmar el papel de los genes identificados como posibles candidatos de la progresión tumoral empleando técnicas avanzadas de secuenciación genómica de tumores |
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