Contingut i funció dels miRNAs de l'espermatozoide humà
Els miRNAs són molècules de 22-24nt implicades en la regulació de l'expressió gènica de nombrosos processos biològics. Alguns autors han identificat perfils d'expressió de miRNAs alterats en diversos casos d'infertilitat masculina i han suggerit que aquests poden estar associats a ano...
| Autores: | , |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2016 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de Documents de la UAB |
| Idioma: | catalán |
| OAI Identifier: | oai:ddd.uab.cat:166185 |
| Acceso en línea: | https://ddd.uab.cat/record/166185 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Micro RNAs Espermatozoides Esterilitat masculina |
| Sumario: | Els miRNAs són molècules de 22-24nt implicades en la regulació de l'expressió gènica de nombrosos processos biològics. Alguns autors han identificat perfils d'expressió de miRNAs alterats en diversos casos d'infertilitat masculina i han suggerit que aquests poden estar associats a anomalies dels processos d'espermatogènesi i embriogènesi. Els objectius d'aquesta tesi van incloure: i) Optimitzar un mètode d'extracció del transcriptoma complert dels espermatozoides humans que inclogui els miRNAs; ii) Caracteritzar els perfils d'expressió de miRNAs en espermatozoides procedents d'individus fèrtils; iii) Caracteritzar els perfils de miRNAs en espermatozoides procedents de diferents poblacions d'individus infèrtils amb alteracions del seminograma; iv) Avaluar la relació entre els perfils obtinguts i les característiques del seminograma, l'edat, la incidència d'anomalies cromosòmiques en espermatozoides, i els resultats de les tècniques de reproducció assistida (TRA) dels individus estudiats; v) Identificar els miRNAs diferencialment expressats (DE-miRNAs) en les poblacions d'individus infèrtils, així com les seves dianes potencials i els gens continguts en les seves unitats de transcripció, per tal de valorar la possible afectació de processos relacionats amb l'espermatogènesi i embriogènesi. Es van obtenir mostres de semen de 14 individus fèrtils i 34 infèrtils. De tots ells es va recollir informació referent a l'edat i els paràmetres seminals. En els individus infèrtils, també es va obtenir informació en relació a la incidència d'anomalies cromosòmiques numèriques en espermatozoides i de les TRA a què es van sotmetre les parelles. Quatre mostres de semen de pacients fèrtils i quatre de pacients infèrtils es van utilitzar per desenvolupar un protocol d'obtenció d'RNA espermàtic total (inclosos els miRNAs). Aquest es va aplicar sobre les mostres restants: 10 individus fèrtils (població control) i 30 pacients infèrtils amb alteracions pures del seminograma (n=10 astenozoospèrmia, n=10 teratozoospèrmia, n=10 oligozoospèrmia). En tots ells es van analitzar els valors d'expressió de 736 miRNAs per qRT-PCR mitjançant la tecnologia TaqMan®. La població fèrtil va mostrar perfils d'expressió de miRNAs espermàtics altament homogenis, fet que indica una retenció no aleatòria d'aquestes molècules durant l'espermatogènesi. L'anàlisi d'ontologia gènica dels processos biològics associats a les dianes predites del miRNAs presents de forma ubiqua en els espermatozoides d'aquests individus va mostrar un enriquiment de funcions rellevants per la fertilitat, com són la diferenciació i desenvolupament cel·lular, la morfogènesi, i l'embriogènesi. La valoració de la similitud dels perfils d'expressió del conjunt de mostres analitzades va mostrar una classificació dels individus en dos grups clarament diferenciats que mostraven una associació amb el seminograma dels pacients. També es van observar miRNAs correlacionats amb motilitat, concentració espermàtica i l'edat dels individus. Per altra banda, es van identificar 57 DE-miRNAs en espermatozoides d'individus infèrtils: 32 DE-miRNAs en la població d'individus amb astenozoospèrmia, 19 DE-miRNAs en la d'individus amb teratozoospèrmia i 18 en la d'individus amb oligozoospèrmia. L'anàlisi de les dianes predites pels DE-miRNAs mitjançant ontologia gènica va mostrar un enriquiment de processos biològics relacionats amb l'embriogènesi i amb les alteracions seminals específiques presents en els individus analitzats. |
|---|