Obtention, Biochemical and Structural characterization of a hALDH1A3 mutant and Ovocalyxin-32, and field improvements
Les proteïnes son un dels grup biològics de macromolècules més abundants i estan involucrades en gairebé tots els processos que ocorren en un organisme. Poden ser classificades en moltes categories, però un dels criteris més importants és la funció que duu a terme en la cel·lula. Els enzims són prot...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2021 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/671623 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/671623 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Metal·locarboxipeptidases Inhibidors Inhibidores Inhibitors ALDH ALDHS Ciències Experimentals 00 |
| Sumario: | Les proteïnes son un dels grup biològics de macromolècules més abundants i estan involucrades en gairebé tots els processos que ocorren en un organisme. Poden ser classificades en moltes categories, però un dels criteris més importants és la funció que duu a terme en la cel·lula. Els enzims són proteïnes que incrementen la velocitat de reacció, disminuint l’energia d’activació d’aquesta. La presencia d’enzims permet que es duguin a termes reaccions bioquímiques, que no serien possibles a condicions fisiològiques i/o en el temps requerit. Els projectes desenvolupats en aquesta tesis, engloben principalment dos tipus d’enzims: oxidoreductases i proteases. Oxidoreductases son proteïnes que catalitzen la transferència d’electrons de una molecula reductora, a una d’oxidant. Aquest grup d’enzims sol utilitzar NADP+ i NAD+ com cofactors. Les oxidoreductases és una gran família que engloba diferents tipus d’enzims, que poden ser classificades pel tipus de mecanisme usat pel transport de electrons. Les aldehid deshidrogenases (ALDHs), son un dels tipus de oxidoreductases més importants, responsable de la eliminació d’aldehids tòxic per la cèl·lula. En els últims anys, la seva importància medica ha estat demostrada a causa que diverses patologies humanes són causades per mutacions als gens de les ALDH que causen mal funcionament, absència, inactivació o dèficit de proteina. Les patologies relacionades son varies: diferents tipus de càncers, anormalitats neurològiques i malalties metabòliques, entre altres. ALDH1A3 participa en la síntesi de acid retinoic a parti del retinaldheid, i això l’ha establert com un candidat per al tractament de diferent tipus de càncers. Amb l’objectiu d’obtenir informació útil sobre aquesta proteïna, s’ha dissenyat una variant mutant de la ALDH1A3 que es veu afectat el residu catalitic, El objectiu d’aquesta mutació era realitzar un estudi amb profunditat no solament a nivell cinètic sinó també a nivell estructura. El nostre objectiu era obtenir informació estructural del mutant sol, o bé interaccionant amb el substrat, el cofactor i alguns inhibidors. Aquesta informació pot ser una útil eina pel disseny de nous fàrmacs per mitigar els efectes de l’ALDH1A3 en les patologies en les quals esta involucrades. Les proteases són els enzims responsables de la escissió del enllaç peptídic i degradació proteica. Estan involucrades en diferents processos biològics exercint un rol crític per la supervivència dels organismes. Les proteases engloben una gran família de proteïnes amb la capacitat de hidrolitzar l’enllaç peptídic a diferents posicions. Aquesta tesis es centra en les metal·locarboxipeptidases (MCPs), una subfamília de proteases responsables de la hidròlisi del enllaç peptídic del residu localitzat en el C-terminal de la proteïna. Recentment, les MCPs han esdevingut més rellevants degut a la seva implicació en varies patologies com càncer i epilèpsia , entre altres. Degut a la seva importància tant a nivell biotecnològic com biomèdic, la necessitat de desenvolupar metodologies que ens permetin la seva obtenció de forma recombinant per al seu estudi ha augmentat. Per aquest motiu, en aquesta tesi suggerim un nou protocol millorat i econòmic, per la producció recombinant de MCPs que presentin afinitat per heparina. Una altra molècula important per l’estudi de les MCPs, són els inhibidors. Els inhibidors de MCPs, solen ser petites proteïnes que s’encarreguen de bloquejar l’activitat del enzim, i poden ser usats com a reguladors o fins i tot com a fàrmacs. Inhibidors d’alt pes molecular com la Latexina també han estat descrits, i en aquesta tesis es descriu un inhibidor homòleg a la latexina, extret de closca d’ou. Aquest inhibidor obtingut s’anomena Ovocalyxin-32 is mostra una forta interacció per alguns membres de la família de les MCPs |
|---|