Coexistència de dos regulons LexA a Pseudomonas putida
El sistema SOS és una xarxa multigènica controlada negativament per la proteïna LexA, i està format per un conjunt de gens implicats en el manteniment de la viabilitat cel·lular davant de lesions en el DNA. Aquest sistema es troba en la majoria d'espècies bacterianes, malgrat que existeixen dif...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2008 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/3906 |
| Acceso en línea: | http://www.tdx.cat/TDX-0229108-161127 http://hdl.handle.net/10803/3906 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | SOS LexA Pseudomonas putida Ciències Experimentals 579 |
| Sumario: | El sistema SOS és una xarxa multigènica controlada negativament per la proteïna LexA, i està format per un conjunt de gens implicats en el manteniment de la viabilitat cel·lular davant de lesions en el DNA. Aquest sistema es troba en la majoria d'espècies bacterianes, malgrat que existeixen diferències tant en la seqüència d'unió de la proteïna LexA, com en el contingut genètic del reguló. En la present memòria es descriu el sistema SOS de Pseudomonas putida, un bacteri gramnegatiu pertanyent al grup Gamma. Primerament s'han clonat els dos gens lexA, anomenats lexA1 i lexA2, i s'han obtingut els seus productes gènics mitjançant sobreexpressió i purificació per columnes d'afinitat. Ambdues proteïnes s'han utilitzat en assaigs de mobilitat electroforètica (EMSA) amb els promotors de cada un dels gens lexA. Així s'ha pogut identificar la seqüència d'unió de la proteïna LexA1 (CTGTN8ACAG) i de la proteïna LexA2 (AGTACN4GTGCT). Posteriorment, utilitzant RT-PCR, s'ha vist com el gen lexA2 constitueix una única unitat transcripcional amb els gens que el segueixen, formant el casset lexA2-imuA-imuB-dnaE2. Aquest casset s'ha vist que és induïble per danys en el DNA, i que es troba àmpliament distribuït en el domini Bacteria. Seguidament, s'han obtingut dues soques mutants defectives pels gens lexA1 i lexA2, i s'ha analitzat l'expressió gènica de cada una d'elles, respecte la soca salvatge, utilitzant xips de DNA (microarrays). Els resultats obtinguts han demostrat que la proteïna LexA1 controla la majoria de gens del sistema SOS, que a més corresponen amb la resposta convencional del seu grup filogenètic; mentre que la proteïna LexA2 només regula l'expressió de la seva pròpia unitat transcripcional, i la d'un gen (PP3901) pertanyent a un profag resident de P. putida. A més, aquest gen també es troba controlat per la proteïna LexA1, essent l'únic que comparteix les dues regulacions. L'obtenció d'un mutant defectiu pel gen PP3901 ha demostrat que l'expressió d'aquest és necessària per a la transcripció dels gens del profag resident. L'expressió d'aquest profag, però, no origina cap efecte deleteri apreciable sobre el creixement de P. putida. |
|---|