Aislamiento y cultivo de protoplastos de Vanilla odorata y V. pompona
El objetivo de esta investigación fue producir un protocolo eficiente para el aislamiento de protoplastos de Vanilla odorata y de V. pompona y cultivarlos con el propósito de promover su uso en el mejoramiento genético de la vainilla. Se desarrolló por primera vez un protocolo para el aislamiento de...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2024 |
| País: | Costa Rica |
| Institución: | Universidad de Costa Rica |
| Repositorio: | Kérwá |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:kerwa.ucr.ac.cr:10669/92000 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/10669/92000 |
| Access Level: | acceso embargado |
| Palabra clave: | PLANTAS PLANTS VANILLA VAINILLA GENOME MOLECULAR MARKERS |
| Sumario: | El objetivo de esta investigación fue producir un protocolo eficiente para el aislamiento de protoplastos de Vanilla odorata y de V. pompona y cultivarlos con el propósito de promover su uso en el mejoramiento genético de la vainilla. Se desarrolló por primera vez un protocolo para el aislamiento de protoplastos de V. odorata y se optimizó parámetros claves para el aislamiento de ambas especies con rendimientos de cerca de 300,000 protoplastos g 1 de tejido fresco y 85 % de viabilidad. Se caracterizó químicamente los polisacáridos de la pared celular de cuatro especies de Vanilla y se encontraron perfiles específicos de azúcares neutros y de ácidos urónicos que podrían tener un significado práctico para optimizar la digestión de la pared celular y para formular composiciones de medios adecuados para la regeneración de la pared celular durante el cultivo de protoplastos. Se desarrolló por primera vez protocolos para la regeneración directa e indirecta de V. odorata y la regeneración indirecta de V. pompona. Se evaluó la transferibilidad de 14 loci de microsatélites, originalmente desarrollados para V. planifolia, a 12 de las 13 especies de Vanilla nativas de Costa Rica y a un híbrido. La transferibilidad de estos marcadores reveló relaciones congruentes entre las especies y permitió la identificación de algunas especies. Se optimizó un protocolo de citometría de flujo que previene eficientemente el agrupamiento de núcleos y obstrucciones del instrumento causadas por mucílagos y la presencia de rafidios en el material vegetal de Vanilla. Con este método se midió el contenido de ADN-C del mismo grupo de 12 especies de Vanilla nativas de Costa Rica, el cual varió entre 5.2 y 9.0 pg permitiendo identificar algunas especies. Se comunica por primera vez el contenido de ADN-2C de seis especies y de un híbrido comercial. Se confirmó la ocurrencia del fenómeno de endorreplicación parcial en todas las muestras analizadas. Los resultados de esta investigación contribuyen al estudio del aislamiento y el cultivo de protoplastos de V. odorata y V. pompona, así como a la comprensión de las especies de Vanilla silvestres de Costa Rica menos estudiadas, algunas de las cuales presentan características útiles para el mejoramiento o la diversificación del cultivo de la vainilla. |
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