Clonación y expresión en escherichia coli de genes de celulasas de clostridium ibun 22a
El propósito de este trabajo fue construir una librería genómica a partir de la cepa nativa Clostridium IBUN 22A, utilizando como vector de clonación el plásmido pBluescrip® IIKS+/- y su expresión en Escherichia coli. La detec-ción de ocho clones recombinantes con actividad enzimática se realizó emp...
| Autores: | , , |
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| Tipo de recurso: | artículo |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2002 |
| País: | Colombia |
| Institución: | Universidad Nacional de Colombia |
| Repositorio: | Repositorio UN |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.unal.edu.co:unal/40922 |
| Acceso en línea: | https://repositorio.unal.edu.co/handle/unal/40922 http://bdigital.unal.edu.co/31019/ |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Genomic Library Cellobiohydrolases Cellulose Cellulases Clostridium Librería genómica celobiohidrolasas celulosa celulasas Clostridium solventogénicos |
| Sumario: | El propósito de este trabajo fue construir una librería genómica a partir de la cepa nativa Clostridium IBUN 22A, utilizando como vector de clonación el plásmido pBluescrip® IIKS+/- y su expresión en Escherichia coli. La detec-ción de ocho clones recombinantes con actividad enzimática se realizó empleando el tamizaje enzimático con tres sustratos: celobiosa, carboximetilcelulosa y celulosa pulverizada (nativa). Los halos de hidrólisis fueron detectados por la técnica de rojo congo. Se realizaron análisis por restricción de tres de los plásmidos recombinantes represen-tativos de cada una de las actividades hidrolíticas, sobre los tres sustratos mencionados. Los tamaños de los insertos clonados fueron aproximadamente 1.600,13.000 y 11.000 pb para pBS68, pBS25 y pBS57, respectivamente. Mayores estudios de expresión proteica y caracterización enzimática permitirán definir la especificidad y otros parámetros característicos de estas enzimas. Así mismo, la secuencia de los insertos hará posible analizar y definir con más detalle la potencialidad biotecnología de nuestra cepa hacia la producción de solventes mediante el empleo de sustratos celulósicos como fuente de carbono para la fermentación acetona, butanol, etanol (ABE). |
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