Participación de dyrk quinasas en la regulación de la síntesis de glucógeno en células componentes del epitelio seminífero y en la motilidad espermática
La familia Dual-specificity Tyrosine Regulated Kinases (DYRK) posee actividad Ser/Thr quinasa y está conformada por cinco miembros clasificados en dos grupos, DYRK1A y DYRK1B componen la clase l mientras que DYRK2, DYRK3 y DYRK4 constituyen la clase ll. Estas quinasas poseen similitud en secuencia y...
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| Tipo de documento: | tese |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2018 |
| País: | Chile |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.anid.cl:10533/236578 |
| Acesso em linha: | https://hdl.handle.net/10533/236578 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | Ciencias Naturales Otras Ciencias Naturales |
| Resumo: | La familia Dual-specificity Tyrosine Regulated Kinases (DYRK) posee actividad Ser/Thr quinasa y está conformada por cinco miembros clasificados en dos grupos, DYRK1A y DYRK1B componen la clase l mientras que DYRK2, DYRK3 y DYRK4 constituyen la clase ll. Estas quinasas poseen similitud en secuencia y función, se distribuyen en diversos tejidos y presentan diferencias en la especificidad de sustratos. Las DYRK tienen una alta expresión en testículo, pero poco se sabe del rol que tendría en dicho órgano. El objetivo de este trabajo fue analizar el rol de la familia de las DYRK en la regulación por fosforilación del residuo Ser640 de glucógeno sintasa muscular (MGS), enzima altamente regulada y que se expresa en células componentes del epitelio seminífero. Además, evaluamos los efectos de la inhibición farmacológica sobre la viabilidad y motilidad de espermatozoides. Primero, detectamos la expresión diferencial de las cinco DYRKs mediante qRT-PCR, observando la alta expresión de DYRK1A en las líneas celulares Sertoli adulta 42GPA9 y en germinales GC-1 y GC-2 mientras que a nivel proteico, DYRK1A y DYRK1B son las más abundantes de acuerdo al análisis por Western Blot. Por inmunofluorescencia y fraccionamiento subcelular evaluamos la distribución de las DYRK1A, DYRK1B, MGS y pGS (Ser640), demostrando que estas proteínas comparten el mismo compartimento subcelular y podrían interactuar de acuerdo al análisis de coinmunoprecipitación. Realizamos la inhibición farmacológica de DYRK1A y DYRK1B con INDY (Inhibitor of DYRK) así como también el silenciamiento de ambas enzimas con shRNAs y evaluamos el estado de fosforilación de Ser640 y el contenido de glucógeno, demostrando que hay diferencias en la respuesta celular en cada una de las líneas. Con respecto al efecto de INDY sobre los espermatozoides, vimos que no altera la viabilidad celular y es capaz de incrementar la progresividad del movimiento. Estos hallazgos sugieren que DYRK1A y DYRK1B ejercen un rol regulatorio en la síntesis de glucógeno en Sertoli y células germinales y que ambas quinasas podrían estar modulando el movimiento del espermatozoide sin afectar su supervivencia. |
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