ROL DE hsa-miR-424-5p Y hsa-miR-513c-3p EN LA REGULACIÓN DE LOS NIVELES DE TRANSCRITO DE ATF6α Y XBP1s EN RESPUESTA A IFNγ EN EL SÍNDROME DE SJÖGREN

El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune, inflamatoria y crónica que afecta principalmente a las glándulas salivales (GS) y lagrimales. Las GS de pacientes SS presentan estrés de retículo endoplásmico (RE) crónico y una alteración en la activación de las vías de respuesta a proteínas...

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Detalhes bibliográficos
Autor: Carvajal Garces, Patricia Alejandra
Formato: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2022
País:Chile
OAI Identifier:oai:repositorio.anid.cl:10533/42594
Acesso em linha:https://hdl.handle.net/10533/42594
Access Level:acceso abierto
Palavra-chave:Ciencias Naturales
Otras Ciencias Naturales
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description El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune, inflamatoria y crónica que afecta principalmente a las glándulas salivales (GS) y lagrimales. Las GS de pacientes SS presentan estrés de retículo endoplásmico (RE) crónico y una alteración en la activación de las vías de respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), evidenciado por un aumento de la vía ATF6α y una atenuación de componentes de la vía IRE1α. Además, las GS presentan altos niveles de citoquinas pro-inflamatorias, como IFNγ que ha mostrado ser inductor de estrés de RE. Estudios previos han mostrado que la estimulación con IFNγ induce cambios en la metilación del DNA de los promotores de ATF6α y XBP1s. Interesantemente, la metilación del DNA puede actuar en conjunto con otros mecanismos de regulación de la expresión génica, como los miRNAs. En GS de pacientes SS se reportó una disminución de hsa-miR-424-5p y un aumento de hsa-miR-513c-3p mediante un microarreglo, los cuales por análisis in silico surgirían como candidatos que regularían los niveles de ATF6α y XBP1s, respectivamente. Se ha reportado que las citoquinas como IFNγ regulan la expresión de miRNAs, aunque los mecanismos moleculares no están completamente descritos. A la fecha, no existen estudios reportados que relacionen miRNAs y UPR en el SS y se desconoce el efecto de IFNγ sobre los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p, por lo tanto, es interesante preguntarse si ¿El IFNγ promueve cambios en la expresión de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p, que den cuenta de los cambios en los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s en GS de pacientes SS? Para abordar esta pregunta se planteó la siguiente hipótesis: hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p regulan los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s en respuesta a IFNγ en GS de pacientes SS. Como objetivo general se propuso evaluar el efecto de IFNγ sobre la expresión de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p y cómo éstos regulan los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s, en GS de pacientes SS y en cultivo de acinos en 3 dimensiones (3D). Para probar esta hipótesis, en esta tesis se realizó una secuenciación masiva de sRNAs donde se evaluaron los miRNAs diferencialmente expresados en GS. Además, se determinó los niveles de hsa-miR-424-5p y sus blancos directos ATF6 y SEL1L e indirecto HERP y los niveles de hsa-miR-513c-3p y sus blancos predichos XBP1s y GRP78 en GS de pacientes SS e individuos controles y en el modelo de acinos 3D estimulados por IFNγ. Se realizaron ensayos funcionales y de interacción para determinar si los miRNAs hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p regulan directamente a sus blancos. Los resultados mostraron miRNAs diferencialmente expresados entre pacientes SS e individuos controles que se asociaron con moléculas desreguladas en el SS. Los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p correlacionaron negativamente con los niveles de transcrito y proteicos de ATF6, SEL1L y XBP1s, GRP78, respectivamente en GS de pacientes SS en relación a individuos controles. Más aun, IFNγ indujo cambios en los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p y, en consecuencia, estos cambios promovieron un efecto en los niveles de transcrito y proteicos de ATF6, SEL1L y XBP1s, GRP78, respectivamente en acinos 3D. Por último, los ensayos funcionales y de interacción revelaron que hsa-miR-424-5p tiene como blanco directo al mRNA de ATF6 y a su vez hsa-miR-513c-3p tiene como blanco directo al mRNA de XBP1s. Los mecanismos por los cuales IFNγ promueve cambios en los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p aún deben ser dilucidados. Sobre este punto, es posible hipotetizar que IFNγ promueva el reclutamiento de un complejo represor en el promotor hsa-miR-424-5p lo que disminuiría su transcripción o promueva cambios en NEAT1, un lncRNA que actúa como esponja de hsa-miR-424-5p y que consecuentemente aumente los niveles de transcrito y proteicos de ATF6 y SEL1L en GS de pacientes SS. A su vez, IFNγ promovería la activación de la vía JAK/STAT, lo que conlleva a la activación de STAT1 e IRF1 en el promotor de hsa-miR-513c-3p, lo que potencialmente conduce a una disminución de los niveles de transcrito y proteicos de XBP1s y GRP78 en GS de pacientes SS. Estos resultados, junto con los hallazgos previos, demuestran una nueva visión integrada que sugiere que algunos genes están regulados por la acción combinada de los miRNAs y la metilación del DNA. La modulación de estos mecanismos de regulación de expresión génica por IFNγ puede explicar la expresión alterada de factores de transcripción claves implicados en la proteostasis celular que controlan la función secretora en GS de pacientes SS. Estos hallazgos, nos permiten postular posibles mecanismos moleculares por los cuales la UPR está desregulada en el SS y contribuir a comprender las causas de la hipofunción glandular en este síndrome
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Además, las GS presentan altos niveles de citoquinas pro-inflamatorias, como IFNγ que ha mostrado ser inductor de estrés de RE. Estudios previos han mostrado que la estimulación con IFNγ induce cambios en la metilación del DNA de los promotores de ATF6α y XBP1s. Interesantemente, la metilación del DNA puede actuar en conjunto con otros mecanismos de regulación de la expresión génica, como los miRNAs. En GS de pacientes SS se reportó una disminución de hsa-miR-424-5p y un aumento de hsa-miR-513c-3p mediante un microarreglo, los cuales por análisis in silico surgirían como candidatos que regularían los niveles de ATF6α y XBP1s, respectivamente. Se ha reportado que las citoquinas como IFNγ regulan la expresión de miRNAs, aunque los mecanismos moleculares no están completamente descritos. A la fecha, no existen estudios reportados que relacionen miRNAs y UPR en el SS y se desconoce el efecto de IFNγ sobre los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p, por lo tanto, es interesante preguntarse si ¿El IFNγ promueve cambios en la expresión de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p, que den cuenta de los cambios en los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s en GS de pacientes SS? Para abordar esta pregunta se planteó la siguiente hipótesis: hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p regulan los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s en respuesta a IFNγ en GS de pacientes SS. Como objetivo general se propuso evaluar el efecto de IFNγ sobre la expresión de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p y cómo éstos regulan los niveles de transcrito de ATF6α y XBP1s, en GS de pacientes SS y en cultivo de acinos en 3 dimensiones (3D). Para probar esta hipótesis, en esta tesis se realizó una secuenciación masiva de sRNAs donde se evaluaron los miRNAs diferencialmente expresados en GS. Además, se determinó los niveles de hsa-miR-424-5p y sus blancos directos ATF6 y SEL1L e indirecto HERP y los niveles de hsa-miR-513c-3p y sus blancos predichos XBP1s y GRP78 en GS de pacientes SS e individuos controles y en el modelo de acinos 3D estimulados por IFNγ. Se realizaron ensayos funcionales y de interacción para determinar si los miRNAs hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p regulan directamente a sus blancos. Los resultados mostraron miRNAs diferencialmente expresados entre pacientes SS e individuos controles que se asociaron con moléculas desreguladas en el SS. Los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p correlacionaron negativamente con los niveles de transcrito y proteicos de ATF6, SEL1L y XBP1s, GRP78, respectivamente en GS de pacientes SS en relación a individuos controles. Más aun, IFNγ indujo cambios en los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p y, en consecuencia, estos cambios promovieron un efecto en los niveles de transcrito y proteicos de ATF6, SEL1L y XBP1s, GRP78, respectivamente en acinos 3D. Por último, los ensayos funcionales y de interacción revelaron que hsa-miR-424-5p tiene como blanco directo al mRNA de ATF6 y a su vez hsa-miR-513c-3p tiene como blanco directo al mRNA de XBP1s. Los mecanismos por los cuales IFNγ promueve cambios en los niveles de hsa-miR-424-5p y hsa-miR-513c-3p aún deben ser dilucidados. Sobre este punto, es posible hipotetizar que IFNγ promueva el reclutamiento de un complejo represor en el promotor hsa-miR-424-5p lo que disminuiría su transcripción o promueva cambios en NEAT1, un lncRNA que actúa como esponja de hsa-miR-424-5p y que consecuentemente aumente los niveles de transcrito y proteicos de ATF6 y SEL1L en GS de pacientes SS. A su vez, IFNγ promovería la activación de la vía JAK/STAT, lo que conlleva a la activación de STAT1 e IRF1 en el promotor de hsa-miR-513c-3p, lo que potencialmente conduce a una disminución de los niveles de transcrito y proteicos de XBP1s y GRP78 en GS de pacientes SS. Estos resultados, junto con los hallazgos previos, demuestran una nueva visión integrada que sugiere que algunos genes están regulados por la acción combinada de los miRNAs y la metilación del DNA. La modulación de estos mecanismos de regulación de expresión génica por IFNγ puede explicar la expresión alterada de factores de transcripción claves implicados en la proteostasis celular que controlan la función secretora en GS de pacientes SS. Estos hallazgos, nos permiten postular posibles mecanismos moleculares por los cuales la UPR está desregulada en el SS y contribuir a comprender las causas de la hipofunción glandular en este síndromeAlgunos resultados de la tesis aun no han sido publicados21190502https://hdl.handle.net/10533/42594instname: Conicytreponame: Repositorio Digital RI2.0info:eu-repo/grantAgreement//21190502info:eu-repo/semantics/dataset/hdl.handle.net/10533/93488Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chileinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/Ciencias NaturalesOtras Ciencias NaturalesROL DE hsa-miR-424-5p Y hsa-miR-513c-3p EN LA REGULACIÓN DE LOS NIVELES DE TRANSCRITO DE ATF6α Y XBP1s EN RESPUESTA A IFNγ EN EL SÍNDROME DE SJÖGRENinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionTesisTesishttps://hdl.handle.net/10533/4259432722254-62fc-4912-8211-260bbf53537avirtual::79824-132722254-62fc-4912-8211-260bbf53537avirtual::79824-1ORIGINALTesisdeDoctorado_PDCBM_Patrici ...application/octet-stream4468707https://repositorio.anid.cl/bitstreams/dfd12f8f-a528-41f5-9a61-dc2f83508dd6/downloadf26cc94d21e6e92d53cd72323d99814fMD5110533/42594oai:repositorio.anid.cl:10533/425942024-01-17 16:12:02.19http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/info:eu-repo/semantics/embargoedAccesshttps://repositorio.anid.clRepositorio ANIDaletelier@anid.cl
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