Caracterización del dominio helicoidal de la subunidad gas de la proteína g.

Las proteínas G heterotriméncas (Gαβγ) transducen señales hacia el medio intracelular acoplándose a receptores de membrana (GPCR) y regulando la actividad de sistemas efectores como enzimas y canales iónicos. La subunidad Gα está formada por un dominio de unión e hidrólisis del nucleótido de guanina...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Echeverría-Morán, Valentina
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:1999
País:Chile
Idioma:español
OAI Identifier:oai:repositorio.anid.cl:10533/178845
Acceso en línea:http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/
https://hdl.handle.net/10533/178845
Access Level:acceso abierto
Descripción
Sumario:Las proteínas G heterotriméncas (Gαβγ) transducen señales hacia el medio intracelular acoplándose a receptores de membrana (GPCR) y regulando la actividad de sistemas efectores como enzimas y canales iónicos. La subunidad Gα está formada por un dominio de unión e hidrólisis del nucleótido de guanina denominado dominio GTPásico (DGTPasa) y un dominio denominado helicoidal (DH),que es único para este tipo de proteínas y de función desconocida. La unión del GTP al DGTPasa induce el cambio conformacional de cuatro segmentos peptídicos denominados regiones "switch". Las regiones switch 1, 2 y 3 están en el DGTPasa y han sido caratenzadas como sitios de interacción con el GDP y GTP y con el heterodímero Gβγ. La región switch 4 se ubica en el DH. A través del uso de proteínas quiméricas entre la subunidad Gαs humana y de Xenopus laevis (Antonelli y cols 1994, Torrejón y cols 1998) se identificó una región del DH que comprende las hélices αA, αB y αC y que es la responsable de las diferencias funcionales observada para ambas proteínas Gαs. Debido a que la región switch 4 esta localizada entre las hélices αB y αC, que es una región de cambio conformacional inducido por la unión de GTP y que concentra el mayor número de diferencias aminoacídicas entre ambas proteínas, se decidió mutar la proteína Gas humana en la región switch 4 con el objeto de analizar en mayor detalle su función. En estas mutantes se cambiaron diferentes residuos de la región switch 4 por los presentes en la proteína de Xenopus laevis (S118, M120, V122, P123 y P128). Posteriormente estas proteínas Gαs mutantes se expresaron in vitro e in vivo y se caracterizó su capacidad de activar la adenililciciasa, de unir e hidrolizar GTP y de disociar GOP. La mutación de más de tres residuos disminuyó notablemente la capacidad de la proteína Gαs humana de activar la adeniliciclasa y de intercambiar GDP por GTP. Estos resultados indican claramente que el DH y la región switch 4 de la proteína Gas juegan un rol importante en la modulación del intercambio del nucleótido de guanina a través de un mecanismo que probablemente altera la distancia entre los dominios DGTPasa y OH (interfase de unión del nucleátido), afectando en este caso la salida del GDP y entrada del GTP y en consecuencia la activación de la proteína Gαs. Este mecanismo modulador de la actividad de esta proteína podría ser general para el resto de las proteínas Gα y permitir a través de ta región switch 4 la interacción con otras proteínas que participan en la vía de transducción de señal.

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