Caracterización de la actividad antifúngica de Candida intermedia sobre la levadura contaminante Brettanomyces bruxellensis y estudio del mecanismo de acción
Brettanomyces bruxellensis ha sido descrita como la principal levadura contaminante en la industria vitivinícola. Para evitar su crecimiento, el mosto es suplementado con SO2, el cual está siendo cuestionado por sus posibles daños a la salud. Nuestro laboratorio ha descrito a la cepa Candida interme...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2018 |
| País: | Chile |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.anid.cl:10533/232926 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/10533/232926 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Ingeniería y Tecnología Biotecnología Industrial |
| Sumario: | Brettanomyces bruxellensis ha sido descrita como la principal levadura contaminante en la industria vitivinícola. Para evitar su crecimiento, el mosto es suplementado con SO2, el cual está siendo cuestionado por sus posibles daños a la salud. Nuestro laboratorio ha descrito a la cepa Candida intermedia LAMAP1790 como productora de compuestos antimicrobianos contra bacterias, sin conocer la naturaleza del compuesto ni su efecto sobre B. bruxellensis. Así, el objetivo de este trabajo fue caracterizar dicho compuesto y estudiar su mecanismo de acción antifúngica sobre B. bruxellensis. La exposición de las cepas al sobrenadante de cultivo de C. intermedia mostró que éste afecta de manera específica a B. bruxellensis, sin alterar el crecimiento de Saccharomyces cerevisiae, la principal levadura de la fermentación alcohólica. Mediante fraccionamiento del sobrenadante y estudios bioquímicos, se determinó que el compuesto antifúngico corresponde a un péptido de masa molecular menor a 10 kDa. El mecanismo de acción antifúngico fue estudiado, determinando que la exposición al sobrenadante de C. intermedia provoca en B. bruxellensis un aumento sostenido en los niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) y que su muerte celular estaría asociada a un daño oxidativo. Para identificar el péptido antifúngico se realizó una secuenciación de las proteínas menores a 10 kDa presentes en el sobrenadante mediante 2D-nano-LC-MS/MS. De esta secuenciación se identificaron 14 secuencias peptídicas, las cuales fueron ordenadas de acuerdo con su identidad de secuencia frente a proteínas identificadas en otras cepas de la especie C. intermedia. Dentro de éstas, se seleccionó el péptido denominado P1790 como posible responsable de la actividad antifúngica, por presentar mayor similitud bioquímica y estructural con péptidos antimicrobianos (AMPs) identificados en otros organismos. Ensayos in-vitro utilizando P1790 de origen sintético sobre B. bruxellensis no mostraron correlación con la actividad fungicida ni el aumento sostenido de ROS, dejando así un conjunto de 13 péptidos para continuar analizando su potencialidad antifúngica. Así, este trabajo presenta las bases para la posible utilización de C. intermedia como biocontrolador selectivo de la levadura contaminante B. bruxellensis en la industria vitivinícola. |
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