Generación de un ratón transgénico condiciónal, que sobreexpresa p35, activador neuroespecífico de la cdk5, en el sistema nervióso central aspectos celulares y moleculares en neurodegeneración
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un desorden neurodegenerativo que se caracteriza por dos tipos de agregados proteicos: extracelulares (placas seniles) e intracelulares (ovillos neurofibrilares, ONF). Los ONF están formados principalmente por la proteína tau hiperforforilada.¡ Varias quinasas pued...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2006 |
| País: | Chile |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.anid.cl:10533/180097 |
| Acceso en línea: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ https://hdl.handle.net/10533/180097 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Sumario: | La enfermedad de Alzheimer (EA) es un desorden neurodegenerativo que se caracteriza por dos tipos de agregados proteicos: extracelulares (placas seniles) e intracelulares (ovillos neurofibrilares, ONF). Los ONF están formados principalmente por la proteína tau hiperforforilada.¡ Varias quinasas pueden fosforilar tau, incluyendo Gsk3¡3, MAP quinasa, la proteína quinas a A y la quinasa dependiente de cíclina 5 (cdk5). Se ha postulado que la desregulación de cdk5 sería un evento determinante en la hiperfosforilación de tau en la EA. cdk5 se asocia con p35, expresado predominantemente en neuronas, por lo que la mayor actividad de cdk5 está concentrada en sistema nervioso. La sobreexpresión de p25 (fragmento proteolítico de p35) en varios modelos de ratones transgénicos produce un aumento en la actividad de cdk5 que conlleva hiperfosforilacíón de tau, muerte neuronal y astrogliosis. Con estas evidencias de la participación del complejo cdk5/p35 en procesos de neurodegeneración como la EA, se generó un modelo de ratón transgénico condicional que sobreexpresa la proteína p35 en cerebro de manera regulable con el sistema de expresión génica dependiente de tetraciclina (Tet). Para ello se generó el vector BifetO-P35IEGFP y se analizó la expresión y la regulación de los trangenes en células NzA-tTA. Posteriormente, se obtuvieron 4 líneas de animales transgénicos fundadores (L3, L5, L 7 Y L9) que transportan el transgén. Estos animales fueron cruzados con animales que sobreexpresan tTA en el sistema nervioso central obteniendose animales dobles transgénicos (B~fetOp35IEGFP y tTA). Mediantelt'estem blot se determinó que no hubo sobre expresión de p35 ni expresión de EGFP en todos los animales dobles transgénicos analizados. Posiblemente debido a una inactivación y un posterior silenciamiento de los transgenes. Finalmente, cultivos de neuronas hipocampales de ratón fueron transfectados con BiÍetO-p35IEGFP y tTA en presencia de A¡3¡-42,(y mediante inrnunofluorescencia contra caspasa 3 activada (marcador de apoptósis) se determinó que la mayoría de las neuronas transfectadas eran positivas para caspasa 3 activada. Además, se determinó que en neuronas hipocampales la reversión de la sobre expresión de p35 con tetraciclina revirtió en parte la muerte por apoptósis. Estos resultados demuestran la participación del complejo cdk5/p35 y un posible sinergismo con la vía amieloidogénica en la inducción de apoptósis en neuronas hipocampales. |
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