Formação de vacúolos quiméricos com leishmania amazonensis e trypanosoma cruzi e participação da subunidade d2 da ATPase vacuolar na biogênese dos vacúolos parasitóforos de leishmania amazonensis
De modo a investigar a influência de um vacúolo personalizado por um primeiro patógeno na sobrevida e diferenciação de um segundo, desenvolvemos um modelo in vitro de coinfecção intracelular envolvendo L. (L.) amazonensis e T. cruzi em macrófagos RAW 264.7. Foi possível demonstrar a formação de vacú...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2015 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Repositorio: | Repositório Institucional da UNIFESP |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.unifesp.br:11600/47174 |
| Acceso en línea: | https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2331396 http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47174 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Leishmania amazonensis Trypanosoma cruzi Adenosina trifosfatases Vacúolos quiméricos Vacúolos parasitóforos |
| Sumario: | De modo a investigar a influência de um vacúolo personalizado por um primeiro patógeno na sobrevida e diferenciação de um segundo, desenvolvemos um modelo in vitro de coinfecção intracelular envolvendo L. (L.) amazonensis e T. cruzi em macrófagos RAW 264.7. Foi possível demonstrar a formação de vacúolos quiméricos contendo os dois parasitas, pelo registro videomicrográfico da transferência, diferenciação e multiplicação de T. cruzi no interior do VP de L. (L.) amazonensis. Considerando que o VP recipiente de L. (L.) amazonensis é um compartimento acidificado pela ação das v-ATPases, desenvolvemos um modelo de macrófago RAW 264.7 silenciado para a subunidade d2 da v-ATPase (ATP6V0d2), de modo a verificar se a acidificação vacuolar é decisiva para a diferenciação deste parasita e também de T. cruzi no modelo de dupla infecção. Demonstramos que o tamanho dos VPs de L. (L.) amazonensis foi drasticamente reduzido nos macrófagos silenciados para esta subunidade das V-ATPases, não sendo observados os vacúolos quiméricos após a coinfecção com o T. cruzi. Contudo, na infecção nos macrófagos nocauteados até a interferência da ATP6V0d2 aumentou a multiplicação dos amastigotas no VP e induziu a formação de vacúolos tight-fitting. O silenciamento desta subunidade não interferiu na acidificação de fagolisossomos, mas provocou a inibição do processamento de precursores da forma madura da catepsina D, a inibição da atividade enzimática da lipase ácida lisossomal e diminuição da concentração celular de colesterol. Os resultados obtidos demonstram que o VP característico da L. (L.) amazonensis dá suporte à diferenciação de o T. cruzi, e que o crescimento típico dos VPs desenvolvidos por esta espécie de Leishmania é dependente da subunidade V0d2 das v-ATPases. |
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