Influência do metabolismo de carbono e do nível de oxigênio sobre a localização da permease de lactose em Kluyveromyces lactis
Neste trabalho foi analisada a influência da fonte de carbono e do nível de oxigênio sobre a localização da permease Lac12GFPp na levedura Kluyveromyces lactis. Inicialmente, foi mostrado que K. lactis apresenta afinidade maior para lactose do que para glicose. Os dados indicaram que a localização d...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2007 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade Federal de Viçosa (UFV) |
| Repositorio: | LOCUS Repositório Institucional da UFV |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:locus.ufv.br:123456789/1527 |
| Acceso en línea: | http://locus.ufv.br/handle/123456789/1527 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Kluyveromyces lactis Permease de lactose Metabolismo Oxigênio Lactose permease Metabolism Oxigen CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::BIOLOGIA E FISIOLOGIA DOS MICROORGANISMOS |
| Sumario: | Neste trabalho foi analisada a influência da fonte de carbono e do nível de oxigênio sobre a localização da permease Lac12GFPp na levedura Kluyveromyces lactis. Inicialmente, foi mostrado que K. lactis apresenta afinidade maior para lactose do que para glicose. Os dados indicaram que a localização da permease Lac12GFPp dependente da KlSnf1p não foi afetada pela presença de glicose. A localização dessa permease foi similar quando K. lactis foi cultivada em galactose e glicose, mas diferente quando cultivada em lactose. Os níveis de mRNA do gene LAC12GFP expressos a partir do promotor ADH1, que não está sob a influência da KlSnf1p, foram similares entre a linhagem selvagem e o mutante Klsnf1. Esse resultado mostra que a influência da KlSnf1p sobre a expressão do gene LAC12GFP é exercida marcantemente somente em nível pós-traducional. A análise da localização subcelular da permease de lactose no mutante Klsnf1 evidenciou que a permease é encontrada na membrana do vacúolo, sugerindo que Klsnf1p pode estar envolvida com a translocação da permease para dentro do vacúolo. Em condições hipóxicas, até 3 h de crescimento, foi observado aumento do sinal da permease de lactose na membrana plasmática, em compação com as condições normóxicas. Na tentativa de isolar reguladores negativos do transporte de lactose em K. lactis, realizou-se uma triagem genética (supressão multicópia). A supressão multicópia foi utilizada para selecionar transformantes capazes de suprimir a toxicidade da lactose observada no mutante Kllac4 cultivado em meio mínimo contendo lactose e glicerol como fontes de carbono. Entre os 68 plasmídeos recuperados do mutante Kllac4 transformado com uma biblioteca genômica, nove apresentaram tamanho maior que o do vetor vazio (Kep6). Contudo, os dados deste estudo indicam que a supressão foi devida a uma mutação espontânea. Nesses mutantes, o transporte de lactose não foi prejudicado. |
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