Investigação dos efeitos da inibição farmacológica de HSP70 em células endoteliais humanas primárias de diferentes berços vasculares
As proteínas de choque térmico de 70-kDa (HSP70) constituem uma família de chaperonas moleculares altamente conservadas e presentes em todos os organismos. A família da HSP70 assume papel central na regulação da proteostase, desde o auxílio ao enovelamento de cadeias polipeptídicas recém-sintetizada...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2024 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade de São Paulo (USP) |
| Repositorio: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:teses.usp.br:tde-11042025-110155 |
| Acceso en línea: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11042025-110155/ |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Angiogênese Angiogenesis Células endoteliais Endothelial cells HSP70 Proteostase vascular Shear stress Vascular proteostasis |
| Sumario: | As proteínas de choque térmico de 70-kDa (HSP70) constituem uma família de chaperonas moleculares altamente conservadas e presentes em todos os organismos. A família da HSP70 assume papel central na regulação da proteostase, desde o auxílio ao enovelamento de cadeias polipeptídicas recém-sintetizadas, estabilização da estrutura nativa de proteínas até o endereçamento de proteínas mal enoveladas para a degradação. A HSC70 humana, codificada pelo gene HSPA8, possui expressão constitutiva, enquanto a HSP70 (HSPA1A) possui expressão aumentada em condições de estresse que levam a uma maior incidência de danos às proteínas e maior fragilidade na proteostase. Embora a HSP70 realize interação com receptor de fator de crescimento endotelial vascular 2 (VEGFR2), proteína contendo domínio de lectina tipo C 14a (CLEC14a), oxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e trombomodulina, o exato mecanismo não é claro e a função da HSP70 nas células endoteliais (ECs) de diferentes berços vasculares não é conhecida. Nós padronizamos a formação de tubo em célula endoteliais humanas primárias da veia umbilical (HUVEC), artéria coronária (HCAEC) e artéria pulmonar (HPAEC), e observamos que a inibição química da HSP70 com VER-155008, inibidor competitivo de ATP, bloqueia a angiogênese em todas as ECs testadas. No contexto de doença, mostramos que as ECs isoladas de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo crônico (CTEPH) apresentam formação de tubo prejudicada comparada a HPAEC indicando a função primordial da HSP70 no controle da disfunção endotelial. Com objetivo de estudar a nível molecular a função da HSP70 nas EC, realizamos a imunoprecipitação com anticorpos imobilizados em coluna (kit Pierce Direct IP), mas não foi possível imunoprecipitar a própria HSP70, indicando que esse kit não é apropriado nestes ensaios. Nos vasos, as ECs estão expostas a força hemodinâmica gerada pelo fluxo sanguíneo denominada de força de cisalhamento/shear stress. Em ensaios de mimetização de shear stress, HUVEC tratadas com VER-155008, não alinharam na direção do fluxo em comparação ao controle. Portanto, nós descobrimos que a HSP70 é um essencial mediador da mecanotransdução na célula endotelial. Os nossos dados corroboram dados da literatura da formação de tubo em HUVEC, mostram que é um fenômeno independente do berço vascular, sugerem função essencial da HSP70 na resposta a shear stress e ressaltam a implicação da HSP70 nas doenças cardiovasculares e pulmonares. |
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