Development of multiplex PCR to detect and differentiate the categories of diarrheagenic Escherichia coli

INTRODUCTION: Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered an important cause of diarrhea in developing countries. The correct identification of these microorganisms depends on their differentiation from non-pathogenic members of the intestinal microbiota. DEC can b...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores: Fusco da Costa, Ana Roberta, Batista Lima, Karla Valéria, Oliveira de Sousa, Cintya, Brito Loureiro, Edvaldo Carlos
Tipo de recurso: artículo
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2010
País:Brasil
Institución:Instituto Evandro Chagas (IEC)
Repositorio:Revista Pan-Amazônica de Saúde (RPAS)
Idioma:portugués
OAI Identifier:oai:revista.iec.gov.br:article/1584
Acceso en línea:https://ojs.iec.gov.br/rpas/article/view/1584
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Reacción en Cadena de la Polimerasa
Escherichia coli
Factores de Virulencia
Enfermedades Intestinales
Reação em Cadeia da Polimerase
Fatores de Virulência
Enteropatias
Polymerase Chain Reaction
Virulence Factors
Intestinal Diseases
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Desarrollo de PCR multiplex para detección y diferenciación de categorías de Escherichia coli diarreogénicos
Desenvolvimento de PCR multiplex para detecção e diferenciação de categorias de Escherichia coli diarreiogênicas
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description INTRODUCTION: Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered an important cause of diarrhea in developing countries. The correct identification of these microorganisms depends on their differentiation from non-pathogenic members of the intestinal microbiota. DEC can be classified into one of six categories according to their mechanism of pathogenicity.MATERIALS AND METHODS: Two multiplex PCR systems used to detect enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC), enteroinvasive (EIEC) and Shiga Toxin-producing (STEC) E. coli were evaluated and described.RESULTS: Four categories of DEC were detected among isolates of E. coli obtained from individuals infected with HIV. EIEC and EPEC were among the most prevalent pathotypes. Furthermore, two STEC strains that were both stx1-and eae-positive were identified. This is the first report of this kind of isolation in individuals infected with HIV in the State of Pará. Multiplex PCR proved to be an efficient, fast and reproducible technique for detection of DEC isolates. Both multiplex PCR systems described here produced results 100% similar to those obtained from individual PCR reactions.CONCLUSION: Given their simplicity, cost and efficiency, it is possible to use these protocols to expedite the molecular diagnosis of the distinct categories of DEC. In addition to facilitating the development of new research projects, these findings could support the epidemiological surveillance undertaken by public health agencies and institutes.
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DEC can be classified into one of six categories according to their mechanism of pathogenicity.MATERIALS AND METHODS: Two multiplex PCR systems used to detect enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC), enteroinvasive (EIEC) and Shiga Toxin-producing (STEC) E. coli were evaluated and described.RESULTS: Four categories of DEC were detected among isolates of E. coli obtained from individuals infected with HIV. EIEC and EPEC were among the most prevalent pathotypes. Furthermore, two STEC strains that were both stx1-and eae-positive were identified. This is the first report of this kind of isolation in individuals infected with HIV in the State of Pará. Multiplex PCR proved to be an efficient, fast and reproducible technique for detection of DEC isolates. Both multiplex PCR systems described here produced results 100% similar to those obtained from individual PCR reactions.CONCLUSION: Given their simplicity, cost and efficiency, it is possible to use these protocols to expedite the molecular diagnosis of the distinct categories of DEC. In addition to facilitating the development of new research projects, these findings could support the epidemiological surveillance undertaken by public health agencies and institutes.INTRODUCCIÓN: Las Escherichia coli diarreogénicas (DEC) son consideradas una importante causa de diarrea en los países en desarrollo. Para su correcta identificación, esos microorganismos deben ser diferenciados de los miembros no patogénicos de la microbiota intestinal. Las DEC pueden clasificarse en seis categorías, de acuerdo a su mecanismo de patogenicidad.MATERIALES Y MÉTODOS: Se desarrollaron y evaluaron dos sistemas de PCR multiplex para la detección de E. coli enteropatogénicas (EPEC), enterotoxigénica (ETEC), enteroinvasora (EIEC) y productora de toxina Shiga (STEC).RESULTADOS: Cuatro categorías diarreogénicas fueron detectadas entre los aislados de E. coli obtenidos de individuos infectados por HIV, con EIEC y EPEC representando los patotipos más frecuentes. Dos STEC stx1 y eae positivas fueron identificadas, siendo este el primer relato de aislamiento de esa categoría en individuos infectados por HIV en el estado de Pará. La PCR multiplex se mostró como técnica eficiente, rápida y reproductible para la detección de los aislados de DEC. Los dos sistemas de PCR multiplex presentaron resultados 100% concordantes a los encontrados en la PCR simple.CONCLUSIÓN: Debido a su simplicidad, economía y eficiencia, se hace posible la aplicación de los protocolos multiplex para agilizar el diagnóstico molecular de las categorías de DEC, lo que promoverá la elaboración de nuevos proyectos de investigación y dará apoyo a las actividades de vigilancia epidemiológica desarrollados por los institutos de salud pública.INTRODUÇÃO: As Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) são consideradas importante causa de diarreia nos países em desenvolvimento. Para sua correta identificação, esses microrganismos devem ser diferenciados dos membros não patogênicos da microbiota intestinal. As DEC podem ser classificadas em seis categorias, de acordo com seu mecanismo de patogenicidade.MATERIAIS E MÉTODOS: Foram desenvolvidos e avaliados dois sistemas de PCR multiplex para a detecção de E. coli enteropatogênicas (EPEC), enterotoxigênica (ETEC), enteroinvasora (EIEC) e produtora da toxina de Shiga (STEC).RESULTADOS: Quatro categorias diarreiogênicas foram detectadas entre os isolados de E. coli obtidos de indivíduos infectados pelo HIV, com EIEC e EPEC representando os patótipos mais frequentes. Duas STEC stx1 e eae positivas foram identificadas, sendo este o primeiro relato de isolamento dessa categoria em indivíduos infectados pelo HIV no estado do Pará. A PCR multiplex mostrou-se como técnica eficiente, rápida e reprodutível para detecção dos isolados de DEC. Os dois sistemas de PCR multiplex apresentaram resultados 100% concordantes com os encontrados na PCR simples.CONCLUSÃO: Devido sua simplicidade, economia e eficiência torna-se possível a aplicação dos protocolos multiplex para agilizar o diagnóstico molecular das categorias de DEC, o que promoverá a elaboração de novos projetos de pesquisa e darão suporte as atividades de vigilância epidemiológica desenvolvidos pelos institutos de saúde pública.Instituto Evandro Chagas/SCTIE/MS2010-08-05info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersiontext/xmlapplication/pdfhttps://ojs.iec.gov.br/rpas/article/view/1584Revista Pan-Amazônica de Saúde; v. 1 n. 2 (2010): abr-junPan-Amazonian Journal of Health; Vol. 1 No. 2 (2010): abr-junRevista Pan-Amazônica de Saúde; Vol. 1 Núm. 2 (2010): abr-jun2176-62232176-6215reponame:Revista Pan-Amazônica de Saúde (RPAS)instname:Instituto Evandro Chagas (IEC)instacron:IECporhttps://ojs.iec.gov.br/rpas/article/view/1584/1118https://ojs.iec.gov.br/rpas/article/view/1584/1119info:eu-repo/semantics/openAccessFusco da Costa, Ana RobertaBatista Lima, Karla ValériaOliveira de Sousa, CintyaBrito Loureiro, Edvaldo Carlos2024-04-22T22:03:06Zoai:revista.iec.gov.br:article/1584Revistahttp://revista.iec.gov.br/PRIhttps://ojs.iec.gov.br/index.php/rpas/oairevista@iec.gov.br2176-62152176-6223opendoar:2024-04-22T22:03:06Revista Pan-Amazônica de Saúde (RPAS) - Instituto Evandro Chagas (IEC)false
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