Identificação de novas proteínas envolvidas na ativação do inflamassoma de NLRC4
O inflamassoma é uma plataforma multiproteica formada a partir do reconhecimento de diferentes sinais, como o estresse ou dano celular e moléculas microbianas. Dentre os diferentes inflamassomas, NAIP/NLRC4 é um dos mais estudados e está envolvido no reconhecimento de moléculas microbianas no citoso...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2022 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade de São Paulo (USP) |
| Repositorio: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:teses.usp.br:tde-03012023-113847 |
| Acceso en línea: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-03012023-113847/ |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Inflamassoma Inflammasome Legionella pneumophila Pak Pak2 |
| Sumario: | O inflamassoma é uma plataforma multiproteica formada a partir do reconhecimento de diferentes sinais, como o estresse ou dano celular e moléculas microbianas. Dentre os diferentes inflamassomas, NAIP/NLRC4 é um dos mais estudados e está envolvido no reconhecimento de moléculas microbianas no citosol, promovendo resistência do hospedeiro à infecção. Como objetivo principal do trabalho, propusemos identificar novas proteínas envolvidas na ativação do inflamassoma de NLRC4. Para isso, utilizamos a técnica de CRISPR-cas9 para deleção, em macrófagos, de genes previamente identificados em nosso laboratório, para avaliar seus possíveis papéis na ativação do inflamassoma. Dentre os genes, avaliados encontramos uma serina-treonina quinase que demonstrou ter um papel importante na via de ativação de NLRC4. Realizamos ensaios de replicação utilizando Legionella pneumophila como modelo, e descobrimos que a serina-treonina quinase tem papel importante no controle da infecção mediada por NAIP/NLRC4 tanto in vivo, quanto in vitro. Além disto, para investigar se este gene também estaria envolvido na ativação e morte celular por diferentes inflamassomas, macrófagos deficientes para a serinatreonina quinase foram gerados, e estimulados com nigericina, para avaliação do inflamassoma de NLRP3; poly (dA:dT) para avaliação de AIM2; Legionella pneumophila de tipo selvagem para avaliar NAIP/NLRC4; e L. pneumophila deficiente em flagelina para avaliar a ativação mediada via caspase-11. Nossos resultados demonstram que a serina-treonina quinase está envolvida na ativação de todos os inflamassomas, conforme observado pela redução da produção de IL-1β, caspase-1 e morte celular, além de uma redução na formação de punctas de ASC, indicando que essa proteína é importante para a oligomerização de ASC. Além disto, foi observado que a serina-treonina quinase colocaliza com os punctas de ASC, sugerindo uma interação física entre ela com o inflamassoma. |
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