Obtenção e regeneração de protoplastos de Crinipellis perniciosa, agente etiológico da vassoura-de-bruxa no cacaueiro (Theobroma cacao L.)
Este trabalho teve por objetivo definir os parâmetros para a obtenção e regeneração de protoplastos de Crinipellis perniciosa. O melhor estabilizador osmótico para a liberação de protoplastos foi KCl 0.8M em tampão fosfato 10 mM, pH 5.8, contendo 20 mg.mL -1 da enzima lítica Glucanex e 10 mg.mL -1 d...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2001 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade Federal de Viçosa (UFV) |
| Repositorio: | LOCUS Repositório Institucional da UFV |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:locus.ufv.br:123456789/10634 |
| Acceso en línea: | http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10634 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Vassoura-de-bruxa Crinipellis perniciosa Cacaueiro Ciências Agrárias |
| Sumario: | Este trabalho teve por objetivo definir os parâmetros para a obtenção e regeneração de protoplastos de Crinipellis perniciosa. O melhor estabilizador osmótico para a liberação de protoplastos foi KCl 0.8M em tampão fosfato 10 mM, pH 5.8, contendo 20 mg.mL -1 da enzima lítica Glucanex e 10 mg.mL -1 de BSA, após 1 a 2 horas de digestão enzimática do micélio. Os protoplastos foram liberados nestas condições, na ordem de 2,0 x 10 7 por mL de estabilizador osmótico, a partir de 300mg de micélio secundário de C. perniciosa crescido em meio BDA. A melhor freqüência de regeneração obtida foi de 2,0% quando sacarose 0,5M foi utilizada como estabilizador osmótico. A coloração de núcleos dos protoplastos revelou que 58,8% dos protoplastos eram anucleados, 37,5% uninucleados e 3,7% binucleados. Uma análise genética por RAPD de C. perniciosa e das colônias regeneradas a partir de protoplastos não revelou polimorfismos entre elas, embora diferenças, como crescimento lento e aspecto morfológico do micélio de algumas colônias tenham sido observadas. O micélio do isolado de C. perniciosa, bem como das colônias regeneradas a partir de protoplastos, são dicarióticas e apresentam grampos de conexão. |
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