Produção e caracterização da porção Fab do anticorpo anti-digoxina utilizando a tecnologia de phage display.
A digoxina é um medicamento usado para tratar distúrbios cardíacos, com janela terapêutica muito estreita. Para combater seu efeito tóxico, fragmentos Fab do anticorpo policlonal anti-digoxina estão disponíveis comercialmente. Nosso objetivo foi a obtenção de variantes de fragmentos Fab do anticorpo...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2012 |
| País: | Brasil |
| Recursos: | Universidade de São Paulo (USP) |
| Repositorio: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:teses.usp.br:tde-11062012-083314 |
| Acesso em linha: | http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-11062012-083314/ |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | Anticorpos monoclonais Cardiovascular system Clonagem Cloning Digoxin Digoxina Drugs Fármacos Hibridomas Hybridomas Monoclonal antibodies Sistema cardiovascular |
| Resumo: | A digoxina é um medicamento usado para tratar distúrbios cardíacos, com janela terapêutica muito estreita. Para combater seu efeito tóxico, fragmentos Fab do anticorpo policlonal anti-digoxina estão disponíveis comercialmente. Nosso objetivo foi a obtenção de variantes de fragmentos Fab do anticorpo monoclonal anti-digoxina usando a tecnologia phage display, que permite gerar fragmentos de anticorpos de alta afinidade e especificidade. Uma biblioteca combinatória de fragmentos Fab anti-digoxina foi construída no vetor pComb3X a partir do RNA total do hibridoma anti-digoxina. Seis clones foram isolados, todos com sequência idêntica na cadeia pesada. A cadeia leve apresentou 2 clones idênticos, um pseudogene e um clone com um aminoácido distinto no CDR2. Quatro clones apresentando variações na sequência do framework1 da cadeia leve foram expressos como fragmentos Fab solúveis. Todos apresentaram ligação à digoxina-BSA por ELISA e Western blotting. A ligação específica do anticorpo também foi confirmada pelo BIAcore, que permitiu ranqueamento entre os clones. |
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