Desenvolvimento racional de métodos bioanalíticos por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas
No âmbito da bioanálise, frequentemente é requerido o desenvolvimento de métodos bioanalíticos seletivos e sensíveis. Atualmente, a técnica mais amplamente utilizada para quantificar compostos em matrizes biológicas é a cromatografia líquida associada à espectrometria de massas em série (CLAE-EM/EM)...
| Author: | |
|---|---|
| Format: | master thesis |
| Status: | Published version |
| Publication Date: | 2015 |
| Country: | Brasil |
| Institution: | Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) |
| Repository: | Repositório Institucional da UFPE |
| Language: | Portuguese |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.ufpe.br:123456789/27858 |
| Online Access: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/27858 |
| Access Level: | Open access |
| Keyword: | Cromatografia líquida Espectrometria de massas Extração líquido-líquido |
| Summary: | No âmbito da bioanálise, frequentemente é requerido o desenvolvimento de métodos bioanalíticos seletivos e sensíveis. Atualmente, a técnica mais amplamente utilizada para quantificar compostos em matrizes biológicas é a cromatografia líquida associada à espectrometria de massas em série (CLAE-EM/EM) por reunir as características de alta seletividade e alta sensibilidade, além de proporcionar métodos com tempo de análise relativamente curto. Porém, a abordagem usualmente utilizada no desenvolvimento de métodos por CLAE-EM/EM é a de “tentativa e erro”, elevando o custo do processo. Em contrapartida, a técnica de planejamento de experimentos aliada à metodologia de superfície de resposta oferece uma maneira eficiente de conduzir os experimentos e, assim, obter mais informações sobre a relação entre os diversos fatores e as respostas do sistema de CLAE-EM/EM. O objetivo deste estudo foi desenvolver um procedimento sistemático, utilizando as técnicas de planejamento experimental e superfície de resposta, visando à obtenção de métodos bioanalíticos por CLAE-EM/EM de uma forma eficiente. O procedimento proposto foi aplicado no desenvolvimento de um método bioanalítico modelo para quantificação de olanzapina (OLZ) e quetiapina (QTP) em plasma humano, utilizando a venlafaxina (VLX) como padrão interno. O método obtido foi composto de uma coluna HILIC 100 x 2,1 mm, 2,6 μm Phenomenex®, fase móvel acetonitrila (ACN):formato de amônio 10 mmol/L (85,5:14,5), fluxo 0,2 mL/min, além de um espectrômetro de massas triplo quadrupolo no modo MRM monitorando as transições (MRM) 313>256 (OLZ), 384>253 (QTP) e 278>260 (VLX). O método desenvolvido apresentou a total separação cromatográfica dos picos da olanzapina, quetiapina e venlafaxina, além de um incremento médio de área para os analitos de aproximadamente 50% em comparação com a metodologia de otimização univariada, tradicionalmente empregada. Além disso, foi desenvolvido um método de extração líquido-líquido com uma eficiência de processo superior a 70% para todos os fármacos. |
|---|