Endocitosis rápida en células cromafines de ratón : mecanismos asociados, su regulación por Ca2+ y su participación en el reciclado vesicular
En las células cromafines se han descripto varios tipos de endocitosis (clatrinadependiente, kiss and run, bulk endocitosis), las cuales contribuyen a la recuperación y elreciclado de la membrana plasmática, de sus proteínas, y de las vesículas que se hanfusionado por exocitosis. En esta Tesis docto...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2016 |
| País: | Argentina |
| Institución: | Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Repositorio: | Biblioteca Digital (UBA-FCEN) |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | tesis:tesis_n6083_Belingheri |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6083_Belingheri |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | ENDOCITOSIS RAPIDA CA2+ EXOCITOSIS CLATRINA DINAMINA KISS AND RUN BULK ENDOCITOSIS RAPID ENDOCYTOSIS EXOCYTOSIS CLATHRIN DYNAMIN BULK ENDOCYTOSIS |
| Sumario: | En las células cromafines se han descripto varios tipos de endocitosis (clatrinadependiente, kiss and run, bulk endocitosis), las cuales contribuyen a la recuperación y elreciclado de la membrana plasmática, de sus proteínas, y de las vesículas que se hanfusionado por exocitosis. En esta Tesis doctoral se ha medido electrofisiológicamente laendocitosis rápida en células cromafines de ratón, observándose dos modalidades. Por unlado, una endocitosis compensatoria que evoluciona con una única constante temporalrápida de ~8 seg, e internaliza aproximadamente la misma cantidad de membrana que fueexocitada durante la estimulación. Esta modalidad se dispara en respuesta a una entrada de Ca2+ menor a 79 pC (grupo LCG, por “low current group”). Por otro lado, se identificó unaendocitosis en exceso que internaliza una cantidad de membrana mayor a la exocitadapreviamente, evolucionando con dos constantes temporales, una rápida de cinética similara la del LCG y una ultra-rápida de ~0,6 seg. Esta última modalidad es disparada por unaentrada de Ca2+ mayor a 79 pC (grupo HCG, por “high current group”). Por medio de lautilización de fármacos específicos, se demuestra en esta Tesis que la endocitosis rápidadepende específicamente tanto de la entrada de Ca2+ a través de canales dependientesde voltaje (CCDV) de tipo L como del Ca2+ liberado desde el retículo endoplasmático. Además, la utilización de BAPTA demostró que la endocitosis rápida sería dependiente deuna señal de Ca2+ localizada. Por otro lado, dos inhibidores del reclutamiento de clatrinainhibieron totalmente la endocitosis en el grupo LCG, y parcialmente en el grupo HCG. Esto sugiere que en este último grupo, se activaría un mecanismo clatrino-independiente. En HCG ambos componentes cinéticos se vieron afectados por los inhibidores de clatrina,sugiriendo que cuando la entrada de Ca2+ es muy alta la endocitosis clatrina-dependientepuede evolucionar a velocidades aún no reportadas en la literatura. Finalmente,experimentos de imaging con FM1-43 mostraron que la endocitosis en exceso inducidapor una despolarización con alto K+ se compone de una fracción reciclable a vesículasliberables y de otra no reciclable en un período de 30 minutos, siendo la primera inhibidaparcialmente por un bloqueante del reclutamiento de clatrina. Estos resultados en suconjunto nos permiten sugerir un modelo en el cual: (a) la entrada localizada de Ca2+ por CCDV tipo L induce la liberación de más Ca2+ del retículo endoplásmico. (b) Elconsecuente aumento de este catión induce la activación de una endocitosis clatrinadependiente, que debido a su Ca2+ dependencia se muestra muy rápida al comienzomientras el Ca2+ alto persiste en el citosol, y más lenta luego de que la concentracióncitosólica del catión ha disminuido. Esto explicaría la clatrino dependencia de amboscomponentes. (c) Esta endocitosis clatrina dependiente resulta parcialmente en lageneración de nuevas vesículas liberables. (d) La gran entrada de Ca2+ en el grupo HCGinduciría además la activación de un proceso clatrina independiente, que no se recicla envesículas liberables en los tiempos del experimento. |
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