Caracterización bioquímica y molecular de la enzima UDP-glucosa : proteína transglucosilasa de Solanum tuberosum
La enzima UDP-glucosa: proteína transglucosilasa (UPTG) es una glicosiltransferasaautocatalítica descripta inicialmente en tubérculo de papa (Solanum tuberosum L.). Se habíapropuesto que la UPTG era capaz de iniciar la síntesis de α-glucanos unidos a proteína in vitroy que tendría una función de pro...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 1998 |
| País: | Argentina |
| Institución: | Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Repositorio: | Biblioteca Digital (UBA-FCEN) |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | tesis:tesis_n3073_Bocca |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3073_Bocca |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | ALMIDON GLICOSILTRANSFERASA GOLGI POLISACARIDOS SOLANUM TUBEROSUM L. UDP-GLUCOSA: PROTEINA TRANSGLUCOSILASA GLYCOSYLTRANSFERASE POLYSACCHARIDE STARCH UDP-GLUCOSE: PROTEIN TRANSGLUCOSYLASE |
| Sumario: | La enzima UDP-glucosa: proteína transglucosilasa (UPTG) es una glicosiltransferasaautocatalítica descripta inicialmente en tubérculo de papa (Solanum tuberosum L.). Se habíapropuesto que la UPTG era capaz de iniciar la síntesis de α-glucanos unidos a proteína in vitroy que tendría una función de proteína iniciadora de la biosíntesis del almidón. La UPTG detubérculo de papa se purificó hasta aparente homogeneidad, se desarrollaron anticuerpospoliclonales específicos contra la misma y se clonaron cADNs correspondientes a la UPTG porscreening de genotecas de expresión de papa. Ensayos de Northern blot y Western blotmostraron que tanto el ARN mensajero como la proteína UPTG están presentes en un nivelsemejante en todos los tejidos de la planta. Algunas de las secuencias clonadas se expresaron en E. coli obteniéndose UPTG recombinante enzimáticamente activa. Se encontró que tanto lasproteínas recombinantes como la purificada de tubérculo pueden ser glicosiladas a partir de UDP-Glc, UDP-Xil o UDP-Gal y que la glicosilación es reversible. Dos cADNs obtenidosfueron secuenciados totalmente, esto permitió detectar un muy alto grado de identidad (~ 90%)entre la secuencia de la UPTG y varias secuencias de proteínas vegetales de función aún nodeterminada que localizan específicamente en la región trans del aparato de Golgi. La secuenciade la UPTG no presenta zonas hidrofóbicas que puedan corresponder a regiones transmembranani un posible péptido señal que permita su entrada a plástidos o al sistema de endomembranasde la célula. Estos resultados sugieren que la enzima localizaría en el lado citoplásmico delaparato de Golgi y no en los plástidos en donde ocurre la síntesis del almidón, por lo tanto estánen contra de un posible rol de la UPTG en la síntesis de este polisacárido. En ningún organismoque no sea vegetal se encontró una proteína que pueda considerarse homóloga a la UPTG. Estacaracterística, sumada a su localización indicarían una posible función relacionada con la síntesisde los polisacáridos complejos de la pared, función exclusiva del aparato de Golgi de las célulasvegetales. La especificidad de la UPTG por distintos nucleótidos azúcares y la reversibilidad dela reacción de glicosilación hacen pensar que la UPTG podría estar formando parte de unsistema complejo que acople el transporte de nucleótidos azúcares con la síntesis depolisacáridos estructurales. |
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