Efectos y mecanismos subyacentes de la terapia génica con el sistema suicida citosina deaminasa/5-fluorocitosina en melanoma espontáneo canino

Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Allende, Jesica Beatriz
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2020
País:Argentina
Institución:Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Repositorio:Biblioteca Digital (UBA-FCEN)
Idioma:español
OAI Identifier:tesis:tesis_n6742_Allende
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6742_Allende
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:SISTEMA SUICIDA Ycd::Yuprt/5-FC
LIPOFECCION
EFECTO BYSTANDER
ESFEROIDES
COLONIAS
APOPTOSIS
SENESCENCIA
MEDIO CONDICIONADO
Ycd::Yuprt/5-FC SUICIDE SYSTEM
LIPOFECTION
BYSTANDER EFFECT
SPHEROIDS
COLONIES
SENESCENCE
CONDITIONED MEDIUM
Descripción
Sumario:Independientemente de su origen, el melanoma comparte similitudes biológicas en todas las especies. El melanoma espontáneo canino es un tumor altamente maligno, metastásico y letal que se caracteriza por su rápido crecimiento, invasión local y metástasis temprana. Como estudio preclínico dirigido a mejorar los efectos locales de los genes suicidas en pacientes veterinarios oncológicos, exploramos las respuestas de diferentes líneas celulares de melanoma espontáneo canino a la proteína de fusión de la levadura Saccharomyces cereviseae citosina desaminasa/uracil fosforribosil transferasa (Ycd::Yuprt) en combinación con 5-fluorocitosina (5-FC), mediante transferencia génica no viral. Ycd cataliza el paso 5-FC a 5-fluorouracilo (5-FU) que interfiere con la replicación del ADN, mientras que Yuprt conduce a la síntesis de 5-FUTP que inhibe el procesamiento de ARNr y ARNm. En el presente estudio, encontramos que tanto cultivos en 2D como 3D resultaron sensibles al tratamiento, incluso en aquellas líneas que previamente habían manifestado cierta resistencia a otros genes suicidas ya aplicados en la clínica veterinaria. Exploramos los mecanismos subyacentes a la acción de Ycd::Yuprt/5-FC relacionados con muerte celular, arresto del ciclo celular, estrés oxidativo, capacidad clonogénica y efecto bystander, entre otros. Encontramos muerte celular inducida tanto por apoptosis como necrosis, un gran aumento de la fracción subGo y de células en un estadio de senescencia e inhibición de la formación de colonias frente a una alta concentración de 5-FC. Además, demostramos que la citotoxicidad producida dentro de las células fue capaz de difundirse al entorno extracelular, afectando también a las células que no estuvieron expuestas a la transferencia génica, poniendo en evidencia a un fuerte efecto bystander. Estos resultados fundamentan sólidamente el potencial clínico del sistema suicida Ycd::Yuprt/5-FC como adyuvante de cirugía en pacientes veterinarios oncológicos.

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