Expresión de CD44 en tumores murinos y humanos y su relación con el proceso metastásico

CD44, receptor del acido hialurónico, es una glicoproteína demembrana con un dominio extracelular altamente glicosilado, unaporción transmembrana y una cola citoplasmática que interactúa con elcitoesqueleto. Originalmente fue descripta como receptor “homing” encélulas linfocitarias, pero luego se vi...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Ladeda, Virginia Edith
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:1998
País:Argentina
Institución:Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Repositorio:Biblioteca Digital (UBA-FCEN)
Idioma:español
OAI Identifier:tesis:tesis_n3005_Ladeda
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3005_Ladeda
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:ADHESION MOLECULES
CD44
CELL MOTILITY
CELLULAR SIGNALING
METASTATIC CASCADE
Descripción
Sumario:CD44, receptor del acido hialurónico, es una glicoproteína demembrana con un dominio extracelular altamente glicosilado, unaporción transmembrana y una cola citoplasmática que interactúa con elcitoesqueleto. Originalmente fue descripta como receptor “homing” encélulas linfocitarias, pero luego se vio que también se expresa en otrostipos celulares. Existen múltiples formas de esta molécula, llamadasvariantes, que se generan por splicing alternativo de 10 exones. La formamas abundante es la llamada estándar ó hemopoyética (CD44s/ H), quecarece de los diez exones alternativos y se expresa predominantemente encélulas hemopoyéticas y mesenquimaticas. Su peso molecular es de 80-90kDa. Sus principales funciones son participar en la activación de linfocitosy en la adhesión y migración celular. Las formas variantes tienen un pesomolecular de 120-150 kDa y se expresan con predominio en tejidosepiteliales. Las funciones precisas de estas isoformas aún no estan claras. En 1991, Gunthert y col., demostraron que la ísoforma v6confería capacidad metastasica al ser transfectada en células tumorales nometastásicas de rata. Como consecuencia de este hallazgo ha surgido ungran interés por el estudio de CD44 en otros modelos tumorales. En el desarrollo de este plan de Tesis, hemos estudiado la función,expresión y distribución de CD44 en una línea celular tumoral mamariamurina, F3II, altamente invasiva y metastasica. El estudio de la expresiónde CD44 en cortes histológicos de tumores F3II, mostró una alta expresiónde esta molécula asociada al crecimiento subcutaneo de los mismos,mientras que dicha expresión fue prácticamente nula en tumores F3IIcrecidos en forma peritoneal. El analisis de la expresión de CD44, por Western blot e inmunohistoquímica, en cultivos de células tumorales FSIIy normales NMuMG, mostró que las monocapas de células FSII expresanmayores niveles que las células normales. En ambas líneas se pudodetectar, por Western blot, una banda principal de 80 kDa,correspondiente a CD44s. También se observó la presencia de bandas demayor peso molecular, que podrian corresponder a la expresión devariantes de CD44, aunque dicha expresión fue menos evidente en lascélulas NMuMG. Mediante el uso de un anticuerpo monoclonal específico antíCD44 (KM201), hemos demostrado que los procesos de adhesión yspreadíng dc células FSII pueden ser inhibidos en forma significativa. Elanálisis de la expresión de CD44, por inmunocitoquímica durante elspreading, mostró que esta molécula se distribuye en forma contínua (nopunctata) sobre la membrana plasmática, particularmente en los bordesanteriores o de avance y en la zona perinuclear de la membranaplasmática. CD44 no fue detectado en estructuras como filopodios olamelipodios, pero sí entre dichas estructuras. Las células totalmenteextendidas sobre el sustrato, presentaron una significativa disminución dela tinción de CD44 sobre la membrana plasmática, comparado con losestadios iniciales del spreading. Este descenso en la expresión a lo largodel spreading fue confirmado por Western Blot. En ensayos de migración e invasión de células F3II en cámaras Transwell, demostramos que el anticuerpo anti-CD44, fue también capazde inhibir en forma significativa ambos procesos. Además, el tratamientode células FSII con anti-CD44 conjuntamente con anti-uPA, la inhibiciónde la migración se incrementó en un 90%, sugiriendo una acciónsinergíca entre CD44 y uPA en favor de la migración de estas célulastumorales. Además de la asociación funcional entre CD44 y el uPA en elen el proceso de migración, los resultados de ensayos deinmunoprecipitación con anticuerpos específicos, indicaron que elreceptor CD44 estaría físicamente asociado con el uPA, sugiriendo laparticipación conjunta de ambas moléculas en algunas etapas de lacascada metastasica de células tumorales mamarias murinas. En conjunto estos resultados demuestran que, en la línea celulartumoral F3II, CD44 cumple un rol activo en eventos críticos que tienenlugar durante la cascada metastásica, como la adhesión, spreading,migración e invasión celular. Mediante un enfoque farmacológico, se estudiaron las vías deseñalización que participarían en la regulación de la expresión de CD44en células FSII. El tratamiento de células F3II con PMA, activador de PKC,o ácido fosfatídico, producto de la degradación de fosfatídilcolinadependiente de PLD, aumentaron en forma significativa la expresión de CD44. Cuando los cultivos fueron tratados con H7, inhibidor específicode PKC,o con propranolol, inhibidor de la conversión de acido fosfatídicoa DAG,se observó una sensible disminución de la expresión de CD44. Losresultados de estos experimentos sugieren la participación de PKC y PLDen las vias de señales que regulan la expresión de este receptor. Los tumores cerebrales raramente metastatizan pero son muyinvasivos a nivel local. Dado que el AH es un componente abundante de lamatriz extracelular del sistema nervioso central y que CD44 participa ensu degradación, la sobreexpresión de este receptor podría facilitar elproceso invasivo de estos tumores. En un trabajo colaborativo con los Servicios de Oncología y Patología del Hospital Italiano, hemos analizadola expresión de CD44 en 57 tumores de cerebro (14 astrocitomas de bajogrado, 13 astrocitomas anaplásicos, 22 glioblastomas multiformes, 5ependimomas y 3 meduloblastomas). Cuando se analizaron losglioblastomas de distintos estadios, se observó que la sobreexpresión de CD44s se correlaciona en forma lineal con el grado de agresividad deestos tumores (Clasificación de Burger). En cambio, el mismo analisis enependimomas, tumores poco agresivos, mostró una alta expresión de CD44s, mientras que, en meduloblastomas, tumores altamente agresivos,la expresión de esta molécula, fue casi nula. No se detectó expresión devariantes de CD44 en ninguno de los tumores estudiados. Nuestrosresultados sugieren que la sobreexpresión de CD44s podria ser deimportancia durante el desarrollo de tumores humanos de origenneuroglial.

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