Caracterización de una vacuna compuesta por células dendríticas. Estudio del mecanismo de acción en la protección contra el melanoma murino B16F1
Se caracterizaron de forma fenotípica y funcional las células dendríticas (CD)derivadas del cultivo de precursores de médula ósea, y se estudió el mecanismomediante el cual la vacuna CD/Apo-Nec, constituida por CD co-cultivadas con célulasapoptóticas y necróticas del melanoma murino B16F1 (Apo-Nec),...
| Autor: | |
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| Tipo de documento: | tese |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2015 |
| País: | Argentina |
| Recursos: | Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Repositório: | Biblioteca Digital (UBA-FCEN) |
| Idioma: | espanhol |
| OAI Identifier: | tesis:tesis_n5743_Campisano |
| Acesso em linha: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5743_Campisano |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | CELULAS DENDRITICAS MELANOMA VACUNA INMUNOTERAPIA MURINO MEDULA OSEA DENDRITIC CELLS VACCINE IMMUNOTHERAPY MURINE BONE MARROW |
| Resumo: | Se caracterizaron de forma fenotípica y funcional las células dendríticas (CD)derivadas del cultivo de precursores de médula ósea, y se estudió el mecanismomediante el cual la vacuna CD/Apo-Nec, constituida por CD co-cultivadas con célulasapoptóticas y necróticas del melanoma murino B16F1 (Apo-Nec), genera protecciónanti-tumoral. Las CD se separaron empleando microesferas magnéticas anti-CD11c, y lasdos poblaciones resultantes en términos de positividad para CD11c (CD+ y CD-),se estudiaron junto a las CD. Se demostró que la población de CD obtenida luego de 7 días de cultivo con elfactor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos murino (mGM-CSF), esheterogénea y presenta aproximadamente un 60% de CD CD11c+. El 26,6% de lascélulas presentes en la fracción CD+ co-expresó los antígenos de superficie CD11c y F4/80, y el 75,4% resultó ser doble positiva para CD11c y CD11b. La fracción CD+también expresó Ly6-G. La fracción CD- quedó enriquecida en macrófagos CD11c-/F4/80+ (44,7%), algunos de los cuales co-expresaron Ly6G (41,8%); y en neutrófilos F4/80-/Ly6-G+(34,6%). Las fracciones CD+ y CD- mostraron una capacidad similar para fagocitar yendocitar antígenos, y expresaron niveles similares de moléculas del complejo mayorde histocompatibilidad de tipo II y moléculas co-estimulatorias CD80, CD83 y CD86,respecto a la población de CD. Sin embargo, sólo la vacuna CD/Apo-Nec fue capaz deconferir una protección significativa. Luego del co-cultivo no se detectó interleuquina-12,ni intracelularmente ni en el sobrenadante de la vacuna CD/Apo-Nec. Por lo cual,la protección obtenida sería independiente de su habilidad para secretar esta citoquinaen el momento de ser administrada. No detectamos una polarización de los macrófagos y neutrófilos derivados delcultivo de CD hacia un fenotipo M1/N1 o M2/N2, antes o después del co-cultivo, lo cualpodría relacionarse con la falta de expresión de interferón-γ, y de secreción deinterleuquina-10 e interleuquina-12 por parte de las células. Las vacunas constituidas por las fracciones CD+ y CD-(CD+/Apo-Nec y CD-/Apo-Nec),indujeron en los sitios de inmunización, la expresión de interleuquina-10 y una elevada producción de óxido nítrico, lo cual podría explicar en parte suincapacidad para conferir protección anti-tumoral. Los resultados obtenidos indicarían que existe una interacción entre laspoblaciones celulares que conforman el cultivo de CD. Variaciones en el número dedichas poblaciones resultarían en la falta de protección; por lo cual todas las célulaspresentes en la vacuna CD/Apo-Nec serían necesarias para inducir protección contrael melanoma murino B16-F1. |
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