Aislamiento y caracterización parcial de bacteriófagos de salmonella spp con potencial aplicación en el biocontrol sobre superficies
La inocuidad alimentaria es un tema amplio y relevante que impacta directamente en todos los segmentos de la sociedad, involucra productores, desarrolladores, innovadores, consumidores y gobierno, además de diversos sectores como la industria, la ingeniería y hasta la educación. Sin embargo, las nue...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2019 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de Documents de la UAB |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ddd.uab.cat:213633 |
| Acceso en línea: | https://ddd.uab.cat/record/213633 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Bacteriòfags Salmonel·la |
| Sumario: | La inocuidad alimentaria es un tema amplio y relevante que impacta directamente en todos los segmentos de la sociedad, involucra productores, desarrolladores, innovadores, consumidores y gobierno, además de diversos sectores como la industria, la ingeniería y hasta la educación. Sin embargo, las nuevas tecnologías en la cadena de producción provocan que ésta sea más larga y compleja. Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) causan alta morbilidad y varios casos de mortalidad. Entre los agentes infecciosos más comunes se encuentran Salmonella spp, Campylobacter spp, Escherichia coli, Clostridium perfringens, Vibrio parahaemolyticus, Clostridium botulinum, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus. Los bacteriófagos o fagos son virus bacterianos específicos de una célula huésped, en la cual se multiplican invadiendo su maquinaria de material genético. Son los sistemas biológicos más abundantes del planeta, se encuentran en el medio ambiente y se introducen y conviven en la flora intestinal de otros seres cuando éstos ingieren diversos alimentos, ya sean de tipo animal o vegetal. El objetivo del presente trabajo fue aislar y probar la especificidad de una serie de bacteriófagos de Salmonella spp a partir de aguas residuales para lo cual se utilizaron muestras de agua recolectadas de diferentes localidades del área metropolitana de Monterrey, N. L., México. La purificación de bacteriófagos se llevó a cabo mediante la técnica de agar doble capa (ADC) hasta obtener placas líticas uniformes y se usaron diferentes cepas de referencia de Salmonella como cultivos indicadores. Se aislaron un total de 15 bacteriófagos putativamente distintos, de los cuales, al pasar las pruebas de replicación, sólo uno logró mantener la capacidad lítica. Se seleccionó y purificó para realizar pruebas in vitro específicas para Salmonella (ATCC 19430). Se utilizó una concentración de bacteriófagos de 1x1012 UFP/ml para analizar al bacteriófago mediante su morfología por microscopía electrónica, la cual se identificó como miembro de la familia Siphoviridae. Así mismo, se probaron los bacteriófagos contra Salmonella in situ en discos de acero que simulan las superficies de trabajo, y para analizar el efecto de la infección del bacteriófago sobre Salmonella en los discos de acero inoxidable se utilizó el microscopio de epifluorescencia. Para el conteo de bacteriófagos se utilizó los métodos LIVE/DEAD y el recuento en placa de agar, la correlación entre ambos métodos fue de R2=0.82. Para finalizar, para evaluar la efectividad del bacteriófago MRH6 que resulto lítico en nuestro ensayo, se procedio a dar las condiciones necesaria para la formación del biofilm de Salmonella sobre superficies de acero inoxidable. El bacteriófago MRH6 fue capaz de disgregar los biofilms a temperatura ambiente. Las mayores reducciones de Salmonella en un menor tiempo se obtuvieron con concentraciones de fago mayores a 1x108 UFP/mL. El método de cultivo mostró reducciones del patógeno a niveles indetectables; sin embargo, la tinción vital reveló la presencia de células viables (coloración verde), que podría representar un riesgo de contaminación cruzada, estas pudieran también presentarse por la presencia de material orgánico. Este trabajo con un bacteriófago puede proporcionar una medida adyuvante para controlar la contaminación de superficies de acero inoxidable con biofilms de Salmonella. La DEM resultó ser una buena herramienta para evaluar rápida y adecuadamente por observación y posterior análisis el efecto de los bacteriófagos. |
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