Padronização de protocolo utilizando partículas magnéticas para extração de DNA do circovírus suíno (PCV)
O Brasil ocupa o quarto lugar no ranking mundial de exportação de carne suína e para alcançar tais índices zootécnicos, os produtores necessitam do controle de várias doenças emergentes em suínos, sendo a identificação e prevenção fatores essenciais. Dentre as principais doenças, destaca-se a circov...
| Autor: | |
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| Tipo de documento: | dissertação |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2022 |
| País: | Brasil |
| Recursos: | Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
| Repositório: | Repositório Institucional da UNESP |
| Idioma: | português |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.unesp.br:11449/237202 |
| Acesso em linha: | http://hdl.handle.net/11449/237202 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | PCV DNA Extração de ácido nucleico Partículas magnéticas PCR quantitativa (qPCR) Nucleic acid extraction Magnetic particles Quantitative PCR (qPCR) |
| Resumo: | O Brasil ocupa o quarto lugar no ranking mundial de exportação de carne suína e para alcançar tais índices zootécnicos, os produtores necessitam do controle de várias doenças emergentes em suínos, sendo a identificação e prevenção fatores essenciais. Dentre as principais doenças, destaca-se a circovirose suína, tendo o circovírus suíno 2 (PCV-2) como agente etiológico. O diagnóstico da circovirose suína se dá por meio dos sinais clínicos associados a testes laboratoriais. A utilização da PCR quantitativa (qPCR) para a determinação da concentração do DNA viral vem sendo considerada o método de escolha neste contexto devido ao alto poder de detecção e na rapidez para obtenção dos resultados. Entretanto, a aplicabilidade desta técnica a torna problemática, devido ao alto custo para a aquisição dos insumos. Um dos principais fatores associados ao elevado custo é a utilização de kits comerciais para extração do ácido nucleico. Grande parte desses insumos são adquiridos pela importação, o que além de refletir no aumento do valor devido a logística, podem ocasionar problemas na produção devido a fatores externos como alta demanda e falta de matéria prima. Com isso, este trabalho teve como objetivo padronizar uma metodologia simples para a extração de DNA, a fim de proporcionar a otimização das análises moleculares para o diagnóstico do PCV em diferentes amostras. O protocolo desenvolvido foi aplicado em amostras de saliva, sangue total e soro de suínos infectados naturalmente. Os produtos das extrações utilizando o protocolo desenvolvido foram submetidas às análises de qPCR para a quantificação do DNA do PCV. Adicionalmente, a análise de integridade do ácido nucleico pela espectrofotometria UV-Vis foi realizada para obtenção dos dados de pureza do material extraído. Dois kits comerciais, um baseado na metodologia de extração por coluna de sílica e o outro por partículas magnéticas, foram utilizados a fim de comparar a eficiência do protocolo proposto. Os protocolos desenvolvidos neste trabalho apresentaram eficiência similar aos kits comerciais para a extração de DNA do PCV para os três tipos de amostras. Todos os protocolos de extração adotados apresentaram baixa pureza em relação às razões 260/280 e 260/230, porém tal fato não interferiu na análise por qPCR. Fatores como simplicidade de execução e possibilidade de automação favorecem a sua utilização. |
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